Gespaltenes PARP (Asp214) Kaninchen-pAb – Q921K2

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der Poly[ADP-Ribose]-Polymerase

• Schlüsselenzym der DNA-Reparatur: PARP1 vermittelt als Reaktion auf DNA-Schäden die Poly-ADP-Ribosylierung (PARylierung) von Zielproteinen und rekrutiert Reparaturmechanismen zu Einzelstrangbrüchen.
• Apoptosemarker: Während der Apoptose spalten Caspase-3 und Caspase-7 das vollständige PARP1 (113 kDa) an Asp214 und erzeugen ein 89-kDa-Fragment, das irreversibel an DNA-Brüche bindet und die Reparatur blockiert, wodurch der programmierte Zelltod gefördert wird.
• AIFM1-vermittelte Apoptose: Das gespaltene Fragment durchläuft eine Auto-PARylierung und fungiert als Träger von Poly-ADP-Ribose. Dadurch wird die Translokation von AIFM1 aus den Mitochondrien in den Zellkern ausgelöst, um eine großflächige DNA-Fragmentierung zu induzieren.
• Subzelluläre Verteilung: Lokalisierung hauptsächlich im Zellkern (Nukleoplasma und Nukleolus) sowie Assoziation mit dem Chromatin; nach der Spaltung transloziert das Fragment in das Zytosol.
• Funktionelle Domänen: Enthält Zinkfingermotive zur DNA-Bindung, eine Automodifikationsdomäne und eine katalytische C-terminale Domäne, die NAD+ als Substrat verwendet.
• Genfamilie: Gehört zur PARP-Superfamilie; Parp1 (Adprt1) ist das Gründungsmitglied. Es ist auch als ADPRT, ARTD1 und PPOL bekannt.
• Posttranslationale Modifikationen: Eine umfassende Auto-Poly-ADP-Ribosylierung moduliert die eigene Aktivität und dient als Gerüst für weitere Reparaturfaktoren. Die Spaltung durch Caspasen ist ein wichtiges regulatorisches Ereignis.
• Schlüsselwörter: ADP-Ribosylierung, allosterisches Enzym, Apoptose, Chromosom, Zytoplasma, DNA-Schädigung, DNA-Reparatur, DNA-Bindung, Glykosyltransferase, Immunität, angeborene Immunität, Isopeptidbindung, Metallbindung, NAD, Nukleotidyltransferase, Zellkern, Identifizierung durch Proteomik, Repeat, Transkription, Transkriptionsregulation, Transferase, Zink, Zinkfinger.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen umfasst die Aminosäurereste 201–300 von Maus-PARP1, einschließlich der Caspase-3/7-Spaltstelle an Asp214. Dieses Design ermöglicht die spezifische Erkennung der gespaltenen Form in Apoptoseexperimenten.
• Für Western Blotting (WB) sollten Lysate aus apoptoseinduziert behandelten Mauszellen oder Mausgeweben (z. B. mit Staurosporin oder Etoposid) verwendet werden, um das Signal zu verstärken. Das vollständige Protein läuft bei etwa 113 kDa, während das gespaltene Fragment bei etwa 89 kDa erscheint.
• Für ELISA kann der Antikörper als Fänger- oder Detektionsreagenz in Sandwich-Assays eingesetzt werden; die Kombination mit einem Pan-PARP-Antikörper ermöglicht die Unterscheidung zwischen gespaltenem und Gesamt-PARP.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität mithilfe von PARP1-Knockout-Zelllinien oder Kontrollen mit Caspase-Inhibitoren, um zu bestätigen, dass das detektierte Band unter nichtapoptotischen Bedingungen verschwindet.
• Vermeiden Sie wiederholte Einfrier- und Auftauzyklen, um die Integrität des Antikörpers zu erhalten; eine kurzfristige Lagerung bei 4 °C ist akzeptabel, für die Langzeitlagerung wird jedoch eine Temperatur von −20 °C oder darunter empfohlen.

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