CAST Kaninchen pAb für WB, ELISA - P20810

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Calpastatin-Funktion und -Lokalisierung

• Calpastatin (CAST) ist ein spezifischer endogener Inhibitor von Calpain, einer Familie calciumabhängiger Cysteinproteasen (EC 3.4.22.-), die am zytoskelettalen Umbau, der Signaltransduktion und der Apoptose beteiligt sind.
• Durch feste Bindung und Hemmung von Calpain reguliert Calpastatin die Proteaseaktivität im Muskelgewebe und spielt eine entscheidende Rolle bei der postmortalen Fleischzartmachung und möglicherweise bei der Kontrolle des Muskelproteinabbaus in lebenden Zellen.
• Das CAST-Gen unterliegt einem umfangreichen alternativen Spleißen, wodurch mehrere Isoformen mit unterschiedlicher Gewebeverteilung und inhibitorischer Kapazität entstehen.
• Calpastatin enthält vier repetitive inhibitorische Domänen (L-Domänen), von denen jede in der Lage ist, Calpain unabhängig zu hemmen, zusammen mit einer N-terminalen Domäne L und einem C-terminalen Ende; diese Multi-Repeat-Architektur liegt seiner potenten und kooperativen Proteasehemmung zugrunde.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Phosphorylierung, Ubiquitinierung und Isopeptidbindungsbildung, die die Protein-Stabilität, Lokalisierung und inhibitorische Effizienz modulieren können.
• Die Expression von Calpastatin wird in einer Vielzahl von Geweben nachgewiesen, mit einer charakterisierten Präsenz in Spermien (als BS-17-Komponente) und einer Krankheitsassoziation mit palmoplantarer Keratodermie.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 510–610 von humanem CAST umspannt; die Antikörperreaktivität kann durch Isoform-Nutzung oder posttranslationale Modifikationen in dieser Region beeinflusst werden.
• Für Western Blot sollte die Optimierung der Primärantikörperkonzentration (z.B. 1:500–1:2000) und die Verwendung geeigneter Positivkontrollen wie HeLa-, HEK293- oder Skelettmuskellysaten in Betracht gezogen werden, in denen Calpastatin endogen exprimiert wird.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit Maus und Ratte; überprüfen Sie die Bandenmuster in diesen Spezies, da sich die Molekulargewichte aufgrund von Isoform-Variationen leicht unterscheiden können.
• Für ELISA sollte der Antikörper gegen das Immunogen-Peptid oder das rekombinante Voll-Längen-Protein titriert werden, um Arbeitskonzentrationen festzulegen; verwenden Sie geeignete Blockierungs- und Waschschritte, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, kann er mehrere Calpastatin-Isoformen detektieren; bestätigen Sie die Spezifität durch siRNA-Knockdown- oder Überexpressionsexperimente in relevanten Zellmodellen.

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