Biotin-markiertes Kaninchen anti-Maus CD45 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P06800

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45 (PTPRC)

• CD45 (Rezeptor-Tyrosinproteinkinase Phosphatase C) ist ein ubiquitär exprimiertes häufiges Leukozytenantigen (L-CA), auch bekannt als Ly-5 und T200. Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, darunter B220 (CD45R), das überwiegend auf B-Lymphozyten vorkommt.
• Es enthält zwei intrazelluläre Proteintyrosinphosphatase-(PTP)-Domänen; die erste Domäne besitzt enzymatische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität moduliert.
• CD45 ist essenziell für die T-Zell-Aktivierung über den Antigenrezeptor und wirkt als positiver Regulator der Koaktivierung bei der Bindung an DPP4.
• Nach der T-Zell-Aktivierung rekrutiert und dephosphoryliert CD45 SKAP1 und FYN, außerdem dephosphoryliert es LYN, um dessen Kinaseaktivität zu modulieren.
• An den Grenzflächen zwischen antigenpräsentierenden Zellen und T-Zellen interagiert CD45 mit CLEC10A auf unreifen dendritischen Zellen, das mit Tn-Antigen modifiziertes CD45 auf Effektor-T-Zellen erkennt und den Aktivierungsschwellenwert anpasst, um Autoreaktivität zu begrenzen.
• Es lokalisiert zur Zellmembran, zu Membranraften und zur immunologischen Synapse, was mit seiner Rolle bei der Signaltransduktion übereinstimmt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen starke N-verknüpfte Glykosylierung und Phosphorylierung an Serin/Threonin-Resten.
• CD45 ist ein Mitglied der Proteintyrosinphosphatase-Familie und gehört zur Klasse I der rezeptorartigen PTPs.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Für die Durchflusszytometrie titrieren Sie den biotinylierten Antikörper über einen Konzentrationsbereich (z. B. 0,1–5 µg/Test), um den optimalen Färbeindex mit Ihrem spezifischen Zellmodell und Ihrem sekundären Streptavidin-Konjugat zu bestimmen.
• Fügen Sie eine geeignete Isotypkontrollfärbung hinzu, um die unspezifische Bindung zu beurteilen – dies ist besonders bei der Verwendung von amplifizierten Nachweissystemen wie Streptavidin-PE oder Streptavidin-APC wichtig.
• Vor der Verwendung validieren Sie den Antikörper in der relevanten Maus-Leukozytenpopulation (z. B. Milzzellen, Lymphknotenzellen oder periphere mononukleäre Blutzellen), um die erwartete Expression und Auflösung zu bestätigen.
• Biotin-Konjugation bietet Flexibilität; verwenden Sie Streptavidin-Konjugate, die zu den Lasern und Filtern Ihres Instruments passen, für Ein- oder Mehrfachfarbpanels.
• Für den indirekten Nachweis sorgen Sie für ausreichende Waschschritte nach der Primärinkubation, um ungebundenen Antikörper zu entfernen und unspezifisches Signal zu minimieren.

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