Biotin Kaninchen-anti-Maus-CD28-monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P31041

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD28

• CD28 ist ein T-Zell-spezifisches Oberflächen-Glykoprotein, das als entscheidender kostimulatorischer Rezeptor für die Aktivierung, Proliferation und das Überleben von T-Zellen fungiert und dadurch die Immunhomöostase aufrechterhält. Zugehörige Referenzen: PMID:7688139
• Bei der Bindung an seine Liganden CD80 (B7-1) oder CD86 (B7-2) auf antigenpräsentierenden Zellen verstärkt CD28 die Signalübertragung des T-Zell-Rezeptors (TCR), was zu einer erhöhten Zytokinproduktion, insbesondere von Interleukin-2 (IL-2), sowohl in CD4+- als auch in CD8+-T-Zell-Subpopulationen führt.
• Mechanistisch rekrutiert die CD28-Ligation die Proteinkinase C-theta (PRKCQ) und GRB2 und aktiviert den NF-kappa-B-Signalweg über sowohl PI3K/Akt-abhängige als auch -unabhängige Kaskaden.
• In Verbindung mit der TCR/CD3-Ligation und der CD40L-Kostimulation fördert CD28 die Produktion von IL-4 und IL-10 und moduliert dadurch die Differenzierung von T-Helferzellen.
• CD28 ist ein einzelständig transmembranöses Typ-I-Membran-Glykoprotein, das sich auf der Zellmembran befindet und eine extrazelluläre immunglobulinähnliche Domäne, eine Transmembranregion sowie einen zytoplasmatischen Schwanz aufweist.
• Das Protein unterliegt posttranslationalen Modifikationen wie Glykosylierung und Phosphorylierung, was sich aus seiner Einstufung als Glykoprotein und Phosphoprotein ergibt.
• CD28 gehört zur Immunglobulin-Superfamilie und enthält eine konservierte Disulfidbindung innerhalb seiner extrazellulären Domäne.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Für die Durchflusszytometrie sollte der biotinylierte Antikörper titriert werden, um die optimale Konzentration für den jeweiligen Probentyp zu bestimmen (z. B. Maus-Splenocyten oder T-Zelllinien). Verwenden Sie zur Detektion einen Streptavidin-konjugierten Fluorophor.
• Fügen Sie geeignete Isotyp-Kontrollantikörper hinzu, um die unspezifische Bindung zu beurteilen.
• CD28 wird auf der Zelloberfläche von T-Zellen exprimiert. Stellen Sie eine ausreichende Zellviabilität und eine Blockierung der Fc-Rezeptoren sicher, um den Hintergrund zu minimieren.
• Validieren Sie die Antikörperleistung in Ihrem spezifischen experimentellen Kontext und erwägen Sie die Verwendung von PMA/Ionomycin-Stimulationskontrollen, um den Aktivierungsstatus der T-Zellen zu überprüfen.

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