Biotin Anti-CD8a monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P01732

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD8a (T-Zell-Oberflächenglykoprotein CD8 Alpha-Kette) Funktion und Lokalisierung

• CD8a ist ein integrales Membranglykoprotein, das als Korezeptor für MHC-Klasse-I-Moleküle auf T-Zellen fungiert und so die Erkennung von Peptidantigenen aus zytosolischen Proteinen ermöglicht.
• Es interagiert gleichzeitig mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und MHC-Klasse I auf antigenpräsentierenden Zellen, rekrutiert die Src-Kinase LCK und initiiert Signalkaskaden, die zur T-Zell-Aktivierung, Lymphokinproduktion und Zytotoxizität führen.
• CD8a bildet entweder Heterodimere mit CD8B auf Thymus-abstammenden T-Zellen oder Homodimere (CD8a/CD8a) auf einer Untergruppe von natürlichen Killerzellen, Gedächtnis-T-Zellen, intraepithelialen Lymphozyten, Monozyten und dendritischen Zellen.
• Das Protein ist in der Zellmembran lokalisiert, aber es existiert auch eine sekretierte Form, die wahrscheinlich durch alternatives Spleißen entsteht.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung und Palmitoylierung, die für seine Struktur und Membranassoziation wichtig sind.
• CD8a hat eine Immunglobulin-ähnliche Domäne und ist Teil des adaptiven Immunsystems, mit Rollen bei der thymischen Selektion und der Erzeugung von CD8-Gedächtnis-T-Zellen.
• Krankheitsvarianten in CD8A sind mit Immundefekten assoziiert, was seine kritische Rolle in der Immunabwehr unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wird gegen ein rekombinantes Protein erzeugt, das der extrazellulären Domäne (aa 22-182) von humanem CD8A entspricht, die die kritische MHC-Klasse-I-Bindungsregion enthält; ziehen Sie in Betracht, die Spezifität unter Verwendung von CD8a-exprimierenden und CD8a-Knockout-Zelllinien in der Durchflusszytometrie zu bestätigen.
• Für Durchflusszytometrie-Anwendungen sollten optimale Färbekonzentrationen unter Verwendung relevanter Primärzellen (z.B. humane PBMCs oder Javaneraffen-Lymphozyten) titriert werden, da die Antigendichte variieren kann; ein Biotin-Streptavidin-Nachweissystem kann die Empfindlichkeit verstärken.
• Die Kreuzreaktivität mit Javaneraffen-CD8a ermöglicht translationale Studien, aber überprüfen Sie die Leistung in Ihrem spezifischen Assay-System, da die Epitopkonservierung variieren kann.
• Da CD8a auf mehreren Immunzell-Untergruppen exprimiert wird, sollten Gating-Strategien zusätzliche Marker (z.B. CD3, CD4) einbeziehen, um zytotoxische T-Zellen von NK-Zellen und Gedächtnispopulationen zu unterscheiden.
• Für die intrazelluläre Färbung kann die Permeabilisierung die Epitopzugänglichkeit beeinflussen; ziehen Sie in Betracht, Fixierungs-/Permeabilisierungsprotokolle mit positiven und negativen Kontrollen zu testen.

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