APC/Cyanine7 Ratten anti-Maus CD45R/B220 monoklonaler Antikörper für FC - P06800

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45R/B220 (CD45)

• CD45, bezeichnet als Rezeptor-Tyrosin-Proteinphosphatase C, ist ein transmembranes Glykoprotein, auch bekannt als Leukozyten-Common-Antigen (L-CA), Ly-5 oder T200. Es dient als kritischer Regulator der Lymphozytenaktivierung und -differenzierung.
• Als Tyrosin-Proteinphosphatase ist CD45 essenziell für die T-Zell-Aktivierung über den Antigenrezeptor. Es reguliert die T-Zell-Koaktivierung bei Bindung an DPP4 positiv und erleichtert die Signalübertragung.
• Die intrazelluläre Region enthält zwei tandemartige Phosphatase-Domänen. Die erste Domäne (D1) besitzt katalytische Aktivität, während die zweite Domäne (D2) die Substratspezifität von D1 beeinflusst und die Signalausgabe feinabstimmt.
• Während der T-Zell-Aktivierung rekrutiert und dephosphoryliert CD45 wichtige Signalmoleküle, darunter SKAP1 und FYN. Es dephosphoryliert auch LYN und moduliert dadurch die LYN-Kinaseaktivität sowie nachgeschaltete Signalwege.
• An der Grenzfläche zwischen antigenpräsentierenden Zellen und T-Zellen interagiert CD45 mit CLEC10A auf unreifen dendritischen Zellen. Diese Interaktion, an der CD45 mit Tn-Antigen auf Effektor-T-Zellen beteiligt ist, moduliert die Aktivierungsschwelle der T-Zellen, um Autoreaktivität zu begrenzen.
• CD45 ist auf der Zellmembran, in Membran-Rafts und Immun-Synapsen lokalisiert, wodurch es sich im Zentrum der Immunsignalübertragung befindet. Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen; die B220-Isoform, die von diesem Antikörper erkannt wird, wird überwiegend auf B-Lymphozyten exprimiert und ist ein klassischer Marker der B-Zell-Linie.
• Schlüsselwörter: alternatives Spleißen, Zellmembran, Glykoprotein, Hydrolase, Membran, Phosphoprotein, Proteinphosphatase, Synapse, Transmembran, Transmembranhelix.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Dieser Antikörper wird als APC/Cyanine7-Konjugat geliefert, optimiert für die Durchflusszytometrie (FC). Überprüfen Sie die Fluoreszenzkompensation mit einfach gefärbten Kontrollen und verwenden Sie eine passende Isotypkontrolle, um Gating-Schwellenwerte festzulegen.
• Das Immunogen besteht aus rekombinantem Maus CD45R/B220 Protein. Für eine optimale Färbung titrieren Sie den Antikörper in der entsprechenden biologischen Matrix (z. B. Maus Milz- oder Lymphknotenzellsuspensionen), um die Konzentration zu bestimmen, die maximales spezifisches Signal bei minimalem Hintergrund liefert.
• Planen Sie die Gestaltung von Multicolor-Panels sorgfältig, um spektrale Überlappungen zu vermeiden; APC/Cyanine7 wird typischerweise von einem 635 nm-Laser angeregt und emittiert im Fernrotkanal, was eine Kompensation mit anderen Fluorophoren in diesem Bereich erfordert.
• Validieren Sie die Expression in dem beabsichtigten Probensystem, wie z. B. maus Lymphgewebe, wo B220 stark auf B-Zellen exprimiert ist. Für nicht standardmäßige Anwendungen werden Pilotexperimente empfohlen.

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