APC/Cyanine7 Anti-Mouse CD45 Rabbit Monoclonal Antibody für Durchflusszytometrie - P06800

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD45-Funktion und Lokalisierung

• Der Rezeptor-Tyrosin-Proteinphosphatase C (CD45), kodiert durch das PTPRC-Gen, ist eine transmembrane Phosphatase, die für die Signaltransduktion in Immunzellen unerlässlich ist. Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen (z. B. CD45R, B220) mit unterschiedlichen extrazellulären Domänen.
• CD45 ist für die T-Zell-Aktivierung über den Antigenrezeptor erforderlich und wirkt als positiver Regulator nach Bindung an DPP4. Es moduliert die Schwelle der T-Zell-Rezeptor-Signalgebung.
• Die intrazelluläre Region enthält zwei Protein-Tyrosin-Phosphatase-Domänen (PTP); die erste besitzt katalytische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität und Aktivität beeinflusst.
• CD45 dephosphoryliert Src-Familien-Kinasen wie LYN, FYN und LCK und reguliert dadurch deren Kinaseaktivitäten und nachgelagerte Signalkaskaden in Lymphozyten.
• Die Wechselwirkung mit CLEC10A auf antigenpräsentierenden Zellen (z. B. unreife dendritische Zellen) justiert die T-Zell-Aktivierung fein und trägt zur Aufrechterhaltung der Selbsttoleranz bei.
• CD45 ist in der Zellmembran lokalisiert und in Membran-Rafts sowie der immunologischen Synapse angereichert, was es für die Integration von Rezeptorsignalen positioniert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen umfangreiche N- und O-verknüpfte Glykosylierung, die die Isoformexpression und Protein-Protein-Interaktionen beeinflusst.
• Bekannt als Leukozyten-common-Antigen (L-CA) und Ly-5, wird CD45 breit auf allen kernhaltigen hämatopoetischen Zellen exprimiert, wobei isoformspezifische Muster Leukozyten-Untermengen unterscheiden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 26–566 von Maus-CD45 und deckt einen großen Teil der extrazellulären Domäne ab. Dieses Design ermöglicht wahrscheinlich die Erkennung mehrerer CD45-Isoformen, aber Benutzer sollten die Isoformspezifität in ihrem System überprüfen.
• Für die Durchflusszytometrie titrieren Sie den APC/Cyanine7-konjugierten Antikörper an Maus-Leukozyten, um die optimale Färbekonzentration zu bestimmen, und fügen Sie geeignete Isotyp- und Fluoreszenz-minus-eins (FMO)-Kontrollen hinzu.
• APC/Cyanine7 emittiert im nahen Infrarotkanal (~780 nm), was eine klare Trennung von gängigen Fluorophoren wie FITC, PE und APC ermöglicht. Verwenden Sie eine kompatible Laserlinie (z. B. 633 nm Anregung) und geeignete Filtersätze.
• Aufgrund der hohen CD45-Expression auf Leukozyten vermeiden Sie Überfärbung, die zu unspezifischer Bindung führen kann; eine typische Startverdünnung von 0,25–1,0 µg pro einer Million Zellen in der Durchflusszytometrie ist ein vernünftiger Referenzwert.
• Für das Paneel-Design sollten Sie CD45 als pan-Leukozyten-Marker verwenden, um lebende Immunzellen zu selektieren (gaten), und dann mit linienspezifischen Antikörpern (z. B. CD3, CD19) für die Immunphänotypisierung kombinieren.

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