APC/Cyanine7 monoklonaler Anti-HLA-DRA-Antikörper für die Durchflusszytometrie – P01903

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von HLA-DRA

• Das HLA-DRA-Gen kodiert die Alpha-Kette des MHC-Klasse-II-Moleküls HLA-DR, die sich mit der Beta-Kette (HLA-DRB) zu funktionellen Heterodimeren auf antigenpräsentierenden Zellen paart. Dieser Komplex präsentiert Peptidantigene gegenüber CD4+-T-Zellen und steuert so die Effektorfunktionen von T-Helferzellen, Antikörperantworten und die Makrophagenaktivierung (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Zugehörige Referenzen: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Präsentiert typischerweise extrazelluläre Peptide mit 10–30 Aminosäuren, die aus endozytierten und lysosomal prozessierten Antigenen stammen. Dabei ist ein hydrophobes Ankerrest an Position 1 entscheidend für die Bindung (PubMed:8145819). Zugehörige Referenzen: PMID:8145819
• Im Tumormikromilieu präsentiert HLA-DR Peptide von apoptotischen Tumorzellen oder sekretierten Tumorproteinen, die von APCs aufgenommen werden, und beeinflusst so die Antitumor-Immunität (PubMed:31495665). Zugehörige Referenzen: PMID:31495665
• Darüber hinaus präsentiert HLA-DR Peptide aus intrazellulären Proteinen über Makroautophagie – ein Prozess, der für die thymische T-Zell-Selektion und die Erhaltung der zentralen Immuntoleranz essenziell ist (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Zugehörige Referenzen: PMID:17182262 PMID:23783831
• Die subzelluläre Lokalisation erstreckt sich über die Zellmembran, endosomale/lysosomale Membranen und Autolysosomen, was seine dynamische Rolle bei der Antigenprozessierung und -präsentation widerspiegelt.
• Exprimiert auf professionellen antigenpräsentierenden Zellen (Makrophagen, dendritische Zellen, B-Zellen) und thymischen Epithelzellen (auf Protein-Ebene) (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Zugehörige Referenzen: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• Das Protein weist eine N-terminale Signalsequenz, eine einzelne Transmembranhelix und zwei Disulfidbindungen in der extrazellulären Domäne auf; es durchläuft eine N-verknüpfte Glykosylierung und kann ubiquitiniert werden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser APC/Cyanine7-konjugierte monoklonale Antikörper wird gegen rekombinantes humanes HLA-DR erzeugt; er erkennt wahrscheinlich ein konformationelles Epitop. Für die Durchflusszytometrie verwenden Sie Standardprotokolle für die Oberflächenfärbung an lebenden Zellen und halten Sie Antikörper und Zellen kalt, um eine Antigeninternalisierung zu verhindern.
• Aufgrund der konservierten Kreuzreaktivität mit Krabbenaffen empfehlen wir Titrationsexperimente sowohl für humane als auch für NHP-Proben, um die optimale Arbeitskonzentration zu bestimmen.
• Um unspezifische Bindung in myeloidenreichen Proben zu minimieren, fügen Sie einen Schritt zur Blockierung der Fc-Rezeptoren hinzu (z. B. humanes TruStain FcX oder ähnliches) und verwenden Sie passende Isotypkontrollen.
• Die 29-kDa-Bande (HLA-DRA-Kette) wird oft als Teil des MHCII-α/β-Heterodimers auf der Zelloberfläche nachgewiesen; unter reduzierenden Bedingungen kann die Alpha-Kette aufgrund der Glykosylierung ein leicht höheres scheinbares Molekulargewicht aufweisen.
• Für intrazelluläre Färbung ist eine milde Fixierung/Permeabilisierung erforderlich; validieren Sie das Protokoll in Ihrem Probensystem, da das Epitop empfindlich gegenüber harten Behandlungen sein kann.

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