APC/Cyanine7 Anti-CD3E Kaninchen monoklonaler Antikörper für intrazelluläre Durchflusszytometrie - P07766

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD3E-Funktion und -Lokalisierung

• Humanes CD3E kodiert die CD3-Epsilon-Kette, eine Kernkomplex des TCR-CD3-Komplexes auf T-Lymphozyten, die für adaptive Immunantworten unerlässlich ist (PubMed:15294938, PubMed:15546002, PubMed:2470098).
  Verwandte Referenzen: PMID:15294938, PMID:15546002, PMID:2470098
• Bei der TCR-Engagement durch antigenpräsentierende Zellen werden die zytoplasmischen ITAM-Motive von CD3E durch Src-Familienkinasen (LCK/FYN) phosphoryliert, wodurch Dockingstellen für ZAP70 geschaffen werden und nachgelagerte Signalkaskaden eingeleitet werden (PubMed:2470098, PubMed:40592325).
  Verwandte Referenzen: PMID:2470098, PMID:40592325
• CD3E ist entscheidend für die ordnungsgemäße T-Zell-Entwicklung und nimmt an der positiven und negativen Selektion im Thymus teil (Aufgrund von Ähnlichkeit).
• Das Protein reguliert auch die TCR-CD3-Oberflächenexpression, indem es die Rezeptorinternalisierung und Down-Regulation über Endozytose-Motive in seiner zytosolischen Region vermittelt (PubMed:10384095, PubMed:26507128).
  Verwandte Referenzen: PMID:10384095, PMID:26507128
• Neben der kanonischen TCR-Signalisierung wirkt CD3E als Rezeptor für ITPRIPL1, der die T-Zell-Aktivierung hemmt, indem er NCK1 rekrutiert und die ZAP70-Interaktion sowie den ERK-NFkB-Weg blockiert (PubMed:12110186, PubMed:38614099).
  Verwandte Referenzen: PMID:12110186, PMID:38614099
• CD3E ist ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein mit einem einzigen Durchgang, das auf der Zellmembran lokalisiert ist; es enthält eine immunglobulinähnliche extrazelluläre Domäne, eine Transmembran-Helix und einen zytoplasmischen Schwanz mit ITAMs.
• Das reife Protein hat ein scheinbares Molekulargewicht von ~23 kDa (UniProt-berechnete Masse: 23.147 Da) und unterliegt einer Phosphorylierung an ITAM-Tyrosinresten.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper ist an APC/Cyanine7 konjugiert und für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC intra) validiert; fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen vor der Färbung gemäß Ihrem Standardprotokoll.
• Das Immunogen erstreckt sich über die Aminosäuren 50–150 innerhalb der extrazellulären Domäne von CD3E; überprüfen Sie die Spezifität durch den Vergleich von positiven (z. B. humane PBMCs) und negativen (CD3E-Knockout) Proben oder durch Vorinkubation mit Blockierpeptid.
• Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration für Ihre Probe zu bestimmen; verwenden Sie geeignete Isotyp-Kontrollen und Fluoreszenzkompensation beim Aufbau von Multicolor-Panels.
• Da die CD3E-Oberflächenexpression nach der T-Zell-Aktivierung schnell herunterreguliert wird, bestätigen Sie den zellulären Aktivierungsstatus und sorgen Sie für eine ausreichende Permeabilisierung, um intrazelluläre Bestände zu erkennen, falls erforderlich.

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