APC-Kaninchen anti-Maus TNF-α monoklonaler Antikörper für FC (intrazellulär) – P06804

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von TNF-α

• Tumornekrosefaktor (TNF-α) ist ein proinflammatorisches Zytokin, das hauptsächlich von aktivierten Makrophagen sezerniert wird und zur Superfamilie der Tumornekrosefaktorliganden (TNFSF2) gehört. Es ist auch als Cachectin bekannt und wird vom Tnf-Gen kodiert (alternative Bezeichnungen: Tnfa, Tnfsf2).
• TNF-α entfaltet seine biologischen Wirkungen durch Bindung an zwei unterschiedliche Rezeptoren, TNFR1 (TNFRSF1A) und TNFR2 (TNFRSF1B), und vermittelt ein breites Spektrum an zellulären Reaktionen einschließlich Apoptose, Zellüberleben und Entzündung.
• Dieses Zytokin ist ein zentraler Mediator der Akutphasenreaktion und kann als endogenes Pyrogen wirken, das Fieber direkt oder durch Stimulation der Interleukin-1-Sekretion induziert, und es ist an der Entwicklung von Kachexie bei chronischen Krankheitszuständen beteiligt.
• Im Fettgewebe induziert TNF-α Insulinresistenz durch Hemmung der insulininduzierten IRS1-Tyrosinphosphorylierung und Glukoseaufnahme und fördert den Abbau des GKAP42-Proteins, was zur Pathogenese von Typ-2-Diabetes beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:25586176
• TNF-α spielt eine bedeutende Rolle im Knochenstoffwechsel durch Förderung der Osteoklastogenese und vermittelt dadurch die Knochenresorption, wodurch Entzündung mit Knochenverlust bei Erkrankungen wie rheumatoider Arthritis verbunden wird. Verwandte Referenzen: PMID:32741026
• Die intrazelluläre Domäne (ICD) von TNF-α, die durch proteolytische Spaltung entsteht, kann als Signalmolekül wirken und die IL-12-Produktion in dendritischen Zellen induzieren, was eine rezeptorunabhängige Funktion hervorhebt.
• Subzellulär wird TNF-α als Transmembranprotein vom Typ II (26 kDa) auf der Zellmembran synthetisiert und durch die TNF-α-Konvertase (TACE) gespalten, um das lösliche 17 kDa-Zytokin freizusetzen. Das Protein erfährt mehrere posttranslationale Modifikationen einschließlich Glykosylierung, Phosphorylierung, Myristoylierung und Disulfidbindungsbildung.
• Neben seinen zytotoxischen und entzündlichen Rollen stimuliert TNF-α auch die Angiogenese synergistisch mit IL-1β und IL-6 und kann unter bestimmten Bedingungen die Zellproliferation und Differenzierung fördern, was seine pleiotrope Natur widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 80-235 von Maus-TNF-α (NP_038721.1) und deckt die Region des reifen löslichen TNF-α ab. Dieses Design zielt auf die extrazelluläre Domäne ab und erkennt potenziell sowohl die membrangebundene als auch die lösliche Form.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie sind Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle kritisch. Verwenden Sie ein Standardprotokoll für intrazelluläre Färbung mit einem für Zytokine geeigneten Fixierungs-/Permeabilisierungskit.
• Da TNF-α ein sezerniertes Protein ist, können ruhende Zellen niedrige intrazelluläre Spiegel aufweisen. Für eine robuste Detektion stimulieren Sie Zellen (z. B. mit PMA/Ionomycin oder LPS) in Gegenwart eines Proteintransportinhibitors (z. B. Brefeldin A oder Monensin), um TNF-α im Golgi-Apparat anzureichern.
• Es wird empfohlen, den Antikörper zu titrieren, um die optimale Konzentration für Ihr spezifisches experimentelles System zu bestimmen, beginnend mit einem Bereich von 0,5-5 µg pro Million Zellen.
• Führen Sie geeignete Kontrollen einschließlich nicht stimulierter Zellen und Isotypkontrollantikörper durch, um spezifische Färbung von Hintergrund zu unterscheiden.
• Der Antikörper ist mit APC konjugiert, einem hellen Fluorophor, das für Mehrfarben-Durchflusszytometrie-Panels geeignet ist. Stellen Sie eine korrekte Kompensation sicher, wenn er zusammen mit anderen Fluorophoren verwendet wird.

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