APC-Kaninchen anti-Mensch/Affe Ki67 Monoklonaler Antikörper für intrazelluläre Durchflusszytometrie - P46013

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Ki67

• Ki-67 wirkt in der frühen Mitose als Chromosomen-Abstoßungsmittel und verhindert den Kollaps von Chromosomen, indem es eine sterische und elektrostatische Ladungsbarriere auf der Chromosomenoberfläche bildet. Verwandte Referenzen: PMID:27362226
• Während der Anaphase der Mitose wechselt Ki-67 zu einem Chromosomen-Attraktionsmittel, fördert die Clusterbildung von Chromosomen und schließt zytoplasmatische Partikel aus dem zukünftigen Kernraum aus. Verwandte Referenzen: PMID:32879492 PMID:39153474
• Dephosphorylierung während des mitotischen Austritts und die Exposition einer konservierten basischen Region induzieren eine RNA-abhängige flüssig-flüssig Phasentrennung, die Chromosomenoberflächen coalesziert. Verwandte Referenzen: PMID:39153474 PMID:28935370
• Ki-67 bindet an DNA, mit einer Präferenz für supercoiled und AT-reiche DNA. Verwandte Referenzen: PMID:10878551
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst Chromosomenoberflächen, Nukleoli und den Zellkern, was mit seiner dynamischen Rolle während des Zellzyklus übereinstimmt.
• Das Protein erfährt mehrere posttranslationale Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die wahrscheinlich seine Aktivität und Lokalisation regulieren.
• Ki-67 kann die höhergeordnete Chromatinorganisation beeinflussen, obwohl seine direkte Rolle noch untersucht wird. Verwandte Referenzen: PMID:24867636
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen von Ki-67, die möglicherweise seine Funktion in verschiedenen zellulären Kontexten modulieren.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 2271–2370 nahe dem C-Terminus entspricht; der Antikörper kann sowohl die volle Länge als auch relevante gespleißte Isoformen erkennen, die dieses Epitop enthalten.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie optimieren Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsschritte, um die Zugänglichkeit des nuklearen Ki-67-Antigens zu gewährleisten.
• Verwenden Sie einen geeigneten Isotyp-Kontrolle und validieren Sie in einer proliferierenden Zelllinie (z. B. HeLa) mit einer ruhenden Zell-Negativkontrolle, um die Spezifität zu bestätigen.
• Aufgrund der großen Proteingröße (359 kDa) sollten Sie ausreichend Events erfassen und geeignete Fluoreszenz-Kompensationseinstellungen verwenden.

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