APC-Konjugierter Kaninchen-Anti-Human-NT5E/CD73 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P21589

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NT5E/CD73-Funktion und Lokalisierung

• Kern-enzymatische Aktivität: NT5E/CD73 ist eine 5'-Nukleotidase, die extrazelluläre Nukleosidmonophosphate in Nukleoside und anorganisches Phosphat hydrolysiert, mit einer starken Präferenz für AMP gegenüber anderen Substraten. Dieser Schritt ist geschwindigkeitsbestimmend für die Erzeugung von immunsuppressivem Adenosin aus ATP.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:21933152 PMID:22997138 PMID:23142347 PMID:34403084
• Substratspezifität: Neben AMP kann das Enzym auch auf IMP, UMP, GMP, CMP und mehrere Desoxynukleotide (dAMP, dCMP, dTMP) sowie NAD und NMN wirken, wobei Ribonukleotidmonophosphate die bevorzugten Substrate sind.
• Subzelluläre Lokalisierung: CD73 ist über einen C-terminalen Glycosylphosphatidylinositol (GPI)-Anker an der äußeren Schicht der Plasmamembran befestigt, wodurch sein aktives Zentrum im extrazellulären Raum positioniert ist, um perizelluläre Nukleotidpools zu regulieren.
• Posttranslationale Modifikationen: Das Protein ist N-glykosyliert und enthält strukturell wichtige Disulfidbrücken. Seine Membrananheftung hängt vollständig vom GPI-Anker ab.
• Strukturelle Merkmale: Es gehört zur Familie der 5'-Nukleotidasen und benötigt Zink und andere zweiwertige Metallionen für die katalytische Aktivität. Das Molekül existiert als Homodimer auf der Zelloberfläche.
• Krankheitsrelevanz: Mutationen in NT5E sind mit der arteriellen Verkalkung aufgrund von CD73-Mangel (ACDC), einer seltenen genetischen Störung, assoziiert, und das Protein ist ein prominentes Ziel für Immun-Checkpoints in der Onkologie.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen deckt die gesamte extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 27–547) ab, die die katalytischen und substratbindenden Regionen umfasst. Dieses Design begünstigt die Erkennung von nativem, korrekt gefaltetem CD73 auf lebenden Zellen.
• Für die Durchflusszytometrie sollten Sie in Erwägung ziehen, den Antikörper zu titrieren, um die optimale Färbekonzentration für Ihren interessierenden Zelltyp zu bestimmen. Schließen Sie geeignete Isotypenkontrollen und Lebensfähigkeitsfarbstoffe ein.
• CD73 wird in einigen Systemen abgespalten oder auf extrazellulären Vesikeln freigesetzt; stellen Sie sicher, dass die Probenvorbereitung Zellschäden minimiert, um falsch-negative Signale zu vermeiden.
• Dieses APC-Konjugat eignet sich gut für Multiplex-Panels; überprüfen Sie die Kompensationseinstellungen bei der Kombination mit anderen Fluorophoren.

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