APC-Konjugierter Kaninchen-Anti-Human-CD172a/SIRPα-Monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P78324

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SIRPα/CD172a-Funktion und -Lokalisierung

• Tyrosin-Protein-Phosphatase-Non-Rezeptor-Typ-Substrat 1 (SIRPα, auch bekannt als SHPS-1, CD172a, BIT, MYD-1, p84) ist ein immunoglobulinähnlicher Zelloberflächenrezeptor, der als Andockprotein für PTPN6 und PTPN11 fungiert und deren Translokation vom Zytosol zur Plasmamembran induziert.
• Fungiert als Rezeptor für CD47 und vermittelt eine negative Regulation der Phagozytose, der Mastzellaktivierung und der dendritischen Zellaktivierung und hemmt nach CD47-Bindung die Reifung und Zytokinproduktion durch dendritische Zellen.
• Unterstützt die Adhäsion von Kleinhirnneuronen, das Auswachsen von Neuriten und die Anhaftung von Gliazellen, was auf eine Rolle bei der Synaptogenese und synaptischen Funktion hindeutet.
• Fungiert als Rezeptor für Thrombospondin-1 (THBS1), welches die SIRPA-Phosphorylierung stimuliert und die Produktion von NADPH-Oxidase-abgeleiteten ROS in nicht-phagozytischen Zellen auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:24511121
• Existiert aufgrund von alternatives Spleißen als drei Hauptisoformen (Sirp-alpha-1, -2, -3), mit ubiquitärer Gewebeexpression, aber höchsten Konzentrationen im Gehirn und auf myeloischen Zellen, und fehlt auf T-Zellen.
• Lokalisiert als Single-Pass-Typ-I-Membranprotein an der Zellmembran, mit einer extrazellulären Region, die drei immunoglobulinähnliche Domänen enthält, und einem cytoplasmatischen Schwanz mit Tyrosin-Phosphorylierungsstellen.
• Stark glykosyliert und phosphoryliert, spielt eine Rolle in der antiviralen Immunität, indem es die Internalisierung von New-World-Arenaviren begrenzt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 31–370, die die gesamte extrazelluläre Domäne abdecken; daher wird erwartet, dass der Antikörper die native Konformation von SIRPα auf der Zelloberfläche erkennt.
• Als APC-konjugierter monoklonaler Antikörper ist er direkt für die Immunfluoreszenzfärbung in der Durchflusszytometrie einsatzbereit, ohne dass ein sekundäres Detektionsreagenz benötigt wird.
• Für eine optimale Färbung sollte der Antikörper auf dem Zielzelltyp (z.B. humane Monozyten, Makrophagen oder dendritische Zelllinien) titriert werden, um die Arbeitskonzentration zu bestimmen.
• Fügen Sie eine geeignete Isotypenkontrolle (APC-konjugiertes Kaninchen-IgG, passender Klon) hinzu und, wenn Sie Vollblut oder gewebsabgeleitete Zellsuspensionen verwenden, inkubieren Sie diese vorab mit einem Fc-Rezeptor-Blockierungsreagenz, um unspezifische Bindung zu minimieren.
• Da SIRPα nicht auf T-Zellen exprimiert wird, können diese als interne negative Kontrolle dienen; validieren Sie die Spezifität unter Ihren experimentellen Bedingungen unter Verwendung bekannter positiver und negativer Zellpopulationen.

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