APC Anti-Human TLR3 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - O15455

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TLR3-Funktion und -Lokalisation

• Toll-like Rezeptor 3 (TLR3), auch bekannt als CD283, IIAE2 und IMD83, ist ein Single-Pass Typ I Membranprotein aus der Familie der Toll-like Rezeptoren, charakterisiert durch Leucin-reiche Repeats (LRRs) in der extrazellulären Domäne und eine Toll/Interleukin-1-Rezeptor (TIR)-Domäne im cytoplasmatischen Schwanz.
• TLR3 ist eine Schlüsselkomponente sowohl der angeborenen als auch der adaptiven Immunität und fungiert als Mustererkennungsrezeptor, der doppelsträngige RNA (dsRNA), ein molekulares Kennzeichen einer Virusinfektion, erkennt und dadurch antivirale Immunantworten auslöst.
• Nach Bindung von dsRNA in Endosomen signalisiert TLR3 ausschließlich über das Adapterprotein TRIF (TICAM1), das die Transkriptionsfaktoren NF-kappa-B und IRF3 aktiviert, was zur Produktion von Typ-I-Interferonen und proinflammatorischen Zytokinen führt.
• Subzellulär lokalisiert TLR3 hauptsächlich an der endoplasmatischen Retikulum-Membran, der Endosomen-Membran und in frühen Endosomen, was es ihm ermöglicht, virale dsRNA zu detektieren, die während der endosomalen Ansäuerung freigesetzt wird.
• TLR3 wird stark in der Plazenta und im Pankreas exprimiert und ist prominent in CD11c+ unreifen dendritischen Zellen zu finden; bemerkenswerterweise ist es der am stärksten exprimierte TLR im Gehirn, insbesondere in Astrozyten, Gliazellen und Neuronen.
• Das Protein unterliegt posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Glykosylierung, Phosphorylierung und Ubiquitin-Konjugation, die seinen Transport und seine Signalaktivität regulieren.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, und Mutationen im TLR3-Gen sind mit Immundefekten und der Anfälligkeit für Herpes-simplex-Enzephalitis assoziiert.
• Mit einem Molekulargewicht von etwa 104 kDa enthält TLR3 mehrere Disulfidbrücken, die seine solenoidförmige LRR-Ektodomäne stabilisieren, was für die Ligandenerkennung essentiell ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen extrazellulären Region (Aminosäuren 24–339), die mehrere LRR-Module umfasst; stellen Sie sicher, dass der Antikörper die native Konformation erkennt, wenn er für die Zelloberflächen- oder endosomale Färbung unter nicht-denaturierenden Bedingungen verwendet wird.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC) ist eine Permeabilisierung erforderlich; testen Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle (z.B. Saponin oder Triton X-100), um die Epitopexposition zu optimieren und gleichzeitig die Fluorophorstabilität zu erhalten.
• Die TLR3-Expression ist in Ruhe-Zellen überwiegend intrazellulär; Stimulation mit dsRNA oder Virusinfektion kann den Rezeptor hochregulieren und umverteilen, daher sollten geeignete positive Kontrollen wie poly(I:C)-behandelte PBMCs oder dendritische Zellen in Betracht gezogen werden.
• Eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies wurde nicht berichtet; validieren Sie die Detektion in der beabsichtigten Probenmatrix, insbesondere angesichts der hohen TLR3-Expression in Plazenta- und Hirngeweben.
• Das APC-Konjugat liefert ein helles Signal für die Durchflusszytometrie; verwenden Sie geeignete Kompensationskontrollen und vermeiden Sie längere Lichteinwirkung, um ein Ausbleichen zu verhindern.

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