Polyklonaler Anti-ZAP70-Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P43403

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ZAP70

• ZAP70 (Tyrosin-Proteinkinase ZAP-70) ist ein 70 kDa großes, mit der Zeta-Kette assoziiertes Protein, auch bekannt als Syk-verwandte Tyrosinkinase, das vom ZAP70-(SRK-)Gen kodiert wird.
• Spielt eine wesentliche Rolle bei der adaptiven Immunantwort, indem es die Beweglichkeit und Adhäsion von T-Zellen, die Zytokinexpression sowie die Entwicklung von Thymozyten reguliert. Nach der TCR-Aktivierung wird ZAP70 über ITAM-Motive an der Plasmamembran zu phosphorylierten CD3-Ketten rekrutiert. Zugehörige Referenz: PMID:7509083
• Die subzelluläre Lokalisation ist überwiegend zytoplasmatisch, mit einer Translokation zur Zellmembran nach TCR-Beteiligung.
• Die Gewebeexpression ist auf T-Zellen, natürliche Killerzellen, frühe Thymozyten sowie Pro-/Prä-B-Zellen beschränkt.
• Enthält tandemartig angeordnete SH2-Domänen am N-Terminus und eine Kinasedomäne am C-Terminus; wird an mehreren Tyrosinresten phosphoryliert und acetyliert.
• Ist außerdem durch die Interaktion mit E3-Ubiquitin-Ligasen für die Internalisierung und den Abbau des TCR erforderlich und moduliert dadurch das Abschalten der T-Zell-Aktivierung.
• Trägt über die B-Zell-Rezeptor-Signalübertragung zur Entwicklung und Aktivierung primärer B-Lymphozyten bei.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 1–300 des humanen ZAP70 (N-terminale Region) und deckt die SH2-Domänen ab; die Reaktivität gegenüber kürzeren Isoformen oder Spleißvarianten sollte experimentell überprüft werden.
• Für den Western Blot sollten Ganzzelllysate aus Jurkat-Zellen oder humanen PBMCs verwendet werden; aufgrund der berichteten Kreuzreaktivität können auch Lysate aus Milzzellen von Maus oder Ratte geeignet sein.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC sollten die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen im relevanten Probensystem validiert werden, da das Protein zytosolisch oder membranassoziiert vorliegen kann.
• ELISA-Anwendungen können eine Optimierung der Beschichtungsbedingungen und der Antikörperverdünnung erfordern; die Einbeziehung eines Blockierungsschritts mit rekombinantem ZAP70-Protein kann helfen, die Spezifität zu beurteilen.

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