Anti-WNK3 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q9BYP7

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: WNK3-Funktion und Lokalisierung

• WNK3 (Proteinkinase lysin-defizient 3) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die vom WNK3-Gen (auch bekannt als KIAA1566, PRKWNK3) kodiert wird und zur WNK-Familie der Kinasen gehört.
• Es ist eine Schlüsselkomponente der WNK3-SPAK/OSR1-Kinasekaskade, die den Elektrolythaushalt und die Zellvolumenwiederherstellung während hyperosmotischen Stresses reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:16275911, PMID:16275913, PMID:16501604
• Bei Zellschrumpfung wirkt WNK3 als molekularer Crowding-Sensor und durchläuft eine Flüssig-Flüssig-Phasentrennung, um membranlose Kondensate zu bilden, die seine Substrate konzentrieren. Verwandte Referenzen: PMID:36318922
• Innerhalb dieser Kondensate phosphoryliert und aktiviert WNK3 die nachgeschalteten Kinasen OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK, die wiederum Ionen-Kotransporter (NKCCs, NCC und KCCs) modulieren, um den Ionenfluss zu steuern. Verwandte Referenzen: PMID:22989884, PMID:16275911, PMID:16275913, PMID:16357011
• WNK3 ist im Zytoplasma lokalisiert und zeigt eine gewebespezifische Expression mit hohen Werten im Gehirn, in der Lunge, der Niere, der Leber und der Bauchspeicheldrüse sowie unterschiedlichen Isoformen im Gehirn (Isoform 1) und in der Niere (Isoform 3).
• Neben seiner Kinaseaktivität dient WNK3 als Gerüstprotein, das die Membranlokalisierung von Transportern wie KCNJ1 und SLC26A9 negativ reguliert und den Calcium-Einstrom über TRPV5/TRPV6 verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:16357011, PMID:17673510, PMID:18768590

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 500–600 des humanen WNK3 und bietet eine gezielte Region für die Antikörpergenerierung; erwägen Sie, die Spezifität mittels Knockout- oder Knockdown-Kontrollen zu überprüfen.
• Beachten Sie für Western Blot, dass WNK3 ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~198 kDa hat; optimieren Sie die Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine (z.B. weniger Methanol im Transferpuffer, längere Transferzeiten).
• Validieren Sie in Immunfluoreszenz-/ICC-Experimenten die Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, da WNK3 ein zytoplasmatisches Protein ist; schließen Sie geeignete Kontrollen ein, um die subzelluläre Lokalisierung zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen bewerten Sie die Leistung des Antikörpers sowohl als Capture- als auch als Detektionsreagenz; die Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-WNK3 deutet auf konservierte Epitope hin, überprüfen Sie dies jedoch stets im relevanten Spezieskontext.

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