Anti-WNK1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q9H4A3

Kerneigenschaften und -parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: WNK1-Funktion und -Lokalisation

• WNK1 (Lysin-defiziente Proteinkinase 1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als Hauptregulator der WNK-SPAK/OSR1-Kinasekaskade fungiert und maßgeblich die Aktivität von Ionen-Cotransportern und den systemischen Blutdruck kontrolliert (PubMed:15883153, PubMed:17190791, PubMed:31656913).
  Verwandte Referenzen: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913
• Unter hyperosmotischem Stress wirkt WNK1 als Sensor für molekulare Verdichtung, durchläuft eine flüssig-flüssig-Phasentrennung und bildet membranlose Kompartimente, die WNK1 mit seinen Substraten OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK konzentrieren, wodurch die nachgeschaltete Phosphorylierung und die regulatorische Volumenzunahme verstärkt werden (PubMed:36318922).
  Verwandte Referenzen: PMID:36318922
• Über seine kanonische Kinasekaskade hinaus übt WNK1 kinaseabhängige Funktionen in der Angiogenese aus, indem es OXSR1/OSR1 für die Chemotaxis und STK39/SPAK für die Endothelzellproliferation aktiviert (PubMed:25362046) und zusätzliche Substrate wie SYT2, PCF11 und NEDD4L phosphoryliert, um jeweils die synaptische Vesikelbindung, den mRNA-Export (PubMed:29196535) und die Membranprotein-Stabilität reguliert.
  Verwandte Referenzen: PMID:25362046, PMID:29196535
• Eine kinasedefekte, nierenspezifische Isoform wirkt als dominant-negativer Regulator des vollständigen WNK1 und moduliert das Natrium- und Kaliumgleichgewicht im distalen Nephron, während die kinaseunabhängigen Gerüstfunktionen von WNK1 die Membranlokalisation verschiedener Transporter und Kanäle wie SLC4A4, SLC26A6, TRPV4 und CFTR kontrollieren und die SGK1-Aktivierung über die Rekrutierung von mTORC2 fördern (PubMed:14645531, PubMed:36373794).
  Verwandte Referenzen: PMID:14645531, PMID:36373794
• WNK1 ist weit verbreitet exprimiert, mit den höchsten Konzentrationen in Hoden, Herz, Niere und Skelettmuskulatur, und zeigt eine spezifische Präsenz in dorsalen Wurzelganglien und den distalen/verbindenden Tubuli der Niere, was mit seinen Rollen in der Nozizeption und Elektrolythomöostase übereinstimmt.
• Subzellulär lokalisiert WNK1 im Zytoplasma, Zellkern und mitotischen Spindelapparat und ist an der Reorganisation des Aktin-Zytoskeletts, der mitotischen Abschnürung und der negativen Regulation der Autophagie beteiligt (PubMed:10660600, PubMed:21220314, PubMed:27911840).
  Verwandte Referenzen: PMID:10660600, PMID:21220314, PMID:27911840
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Ubiquitinierung und Glykosylierung; das Protein ist auch chloridempfindlich, und Mutationen sind mit hereditärer sensorischer und autonomer Neuropathie Typ II (HSAN2) und Pseudohypoaldosteronismus verbunden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (aa 1-210) von humanem WNK1, die sowohl die Voll-Längen- als auch die nierenspezifischen Isoformen erkennen kann – validieren Sie den Nachweis in relevanten Zell- oder Gewebelysaten.
• Für den Western Blot ist eine Bande nahe 250 kDa zu erwarten; jedoch können mehrere Isoformen und potenzielle Spaltprodukte beobachtet werden. Erwägen Sie die Verwendung frischer Proteaseinhibitoren und optimierter Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine.
• Für ELISA-Anwendungen kann die Verwendung des gereinigten rekombinanten Proteins oder Peptids als Positivkontrolle von Vorteil sein, um die Assay-Sensitivität und -Spezifität festzulegen.
• Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte wurde berichtet; überprüfen Sie die Reaktivität in Ihrer Zielart mit geeigneten Kontrollen (z. B. Knockout-Lysate oder Blockierpeptid), wo möglich.
• Bei der Untersuchung der phosphorylierungsabhängigen Signalübertragung beachten Sie, dass dieser polyklonale Antikörper nicht phospho-spezifisch ist; kombinieren Sie ihn mit phospho-spezifischen Antikörpern, um den Aktivierungsstatus von WNK1 zu überwachen.

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