Anti-WNK1 Polyklonale Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q9H4A3

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von WNK1

• WNK1 ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als kritische Komponente der WNK1-SPAK/OSR1-Kinasekaskade dient und Blutdruck sowie Ionenhomöostase reguliert. Bei hyperosmotischem Stress agiert es als Sensor für molekulare Verdichtung und durchläuft eine flüssig-flüssig-Phasentrennung, um ein membranloses Kompartiment zu bilden, das WNK1 mit seinen Substraten OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK konzentriert und deren Phosphorylierung sowie Aktivierung fördert. Verwandte Referenzen: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913, PMID:36318922
• Aktiviertes OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK phosphorylieren und aktivieren Na-K-Cl-Cotransporter (SLC12A1/NKCC2, SLC12A2/NKCC1) und hemmen gleichzeitig K-Cl-Cotransporter (SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), wodurch der Ioneneinstrom und die regulatorische Volumenzunahme gefördert werden. Verwandte Referenzen: PMID:16263722, PMID:21321328, PMID:19665974
• Jenseits des Ionentransports reguliert WNK1 die Angiogenese in Endothelzellen durch Aktivierung des SPAK/OSR1-Signalwegs und trägt so zur Chemotaxis und Proliferation bei. Verwandte Referenzen: PMID:25362046
• WNK1 phosphoryliert Substrate wie PCF11 (Regulation des mRNA-Kernexports) und NEDD4L und agiert als negativer Regulator der Autophagie. Es hat auch kinaseunabhängige Gerüstfunktionen, wie die Stabilisierung des ER-Membranprotein-Komplexes und die Regulation von ENaC durch SGK1-Aktivierung. Verwandte Referenzen: PMID:29196535, PMID:27911840, PMID:33964204, PMID:36373794
• WNK1 wird für die mitotische Abspaltung benötigt und kann an der Reorganisation des Aktin-Zytoskeletts beteiligt sein. Verwandte Referenzen: PMID:21220314, PMID:10660600
• Weit verbreitet exprimiert mit den höchsten Konzentrationen in Hoden, Herz, Niere und Skelettmuskel; eine nierenspezifische kinasedefekte Isoform agiert als dominant-negativer Regulator der Volllängen-Kinase. Subzellulär lokalisiert WNK1 sich im Zytoplasma, Zellkern und der mitotischen Spindel.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen umfasst die N-terminalen Aminosäuren 1-210 des menschlichen WNK1; diese Region überlappt nicht mit der Kinasedomäne (Reste 221–491), sodass sowohl die Volllängenform als auch potenzielle kinasedefekte Isoformen nachgewiesen werden können.
• Beachten Sie für den Western Blot das große vorhergesagte Molekulargewicht (~251 kDa); verwenden Sie ein SDS-PAGE-Gel mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6%) und einen NassTransfer mit verlängerter Zeit, um einen effizienten Transfer sicherzustellen.
• Bei Immunfluoreszenz/Immunzytochemie lokalisiert sich WNK1 im Zytoplasma, Zellkern und der mitotischen Spindel; für den untersuchten Zelltyp und das entsprechende Kompartiment sollte eine geeignete Fixierung und Permeabilisierung validiert werden.
• Als polyklonaler Antikörper kann es zu Chargenvariationen kommen; fügen Sie in jedem Experiment positive (z. B. HeLa, HEK293) und negative Kontrollen hinzu, um die Reaktivität zu bestätigen.
• Für den ELISA wird bei quantitativem Nachweis ein Sandwich-Format mit einem validierten Capture-Antikörper empfohlen.

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