Anti-WNK1 monoklonaler Antikörper für Western Blot – Q9H4A3

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von WNK1

• WNK1 (Serin/Threonin-Proteinkinase WNK1) ist die Kernkinase der WNK1-SPAK/OSR1-Kaskade, ein entscheidender Regulator von Blutdruck und Zellvolumen; es fördert die regulatorische Volumenzunahme, indem es hyperosmotischen Stress erkennt und Ioneneinstromwege aktiviert. Verwandte Referenzen: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913
• Unter hyperosmotischen Bedingungen fungiert WNK1 als Sensor für molekulare Verdichtung und durchläuft eine flüssig-flüssig Phasentrennung zur Bildung membranloser Kompartimente. Diese konzentrieren WNK1 zusammen mit seinen Substraten OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK und verstärken so die Kinassignalisierung. Verwandte Referenzen: PMID:36318922
• Downstream phosphoryliert und aktiviert WNK1 OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK, die wiederum Ionencotransporter (SLC12A1/NKCC2, SLC12A2/NKCC1, SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3) phosphorylieren, um den Transport von Natrium, Kalium und Chlorid zu regulieren und dadurch Zellvolumen und Blutdruck zu steuern. Verwandte Referenzen: PMID:16263722, PMID:21321328, PMID:19665974
• Über den Ionentransport hinaus reguliert WNK1 die Angiogenese über OXSR1/OSR1 und STK39/SPAK in Endothelzellen, moduliert den mRNA-Export durch Phosphorylierung von PCF11, reguliert die Autophagie negativ und ist erforderlich für die Abscission während der Mitose. Verwandte Referenzen: PMID:25362046, PMID:29196535, PMID:27911840, PMID:21220314
• WNK1 wirkt auch als Gerüstprotein unabhängig von seiner Kinaseaktivität: es stabilisiert die EMC2-Komponente des ER-Membrankomplexes und fördert die SGK1-Aktivierung, indem es es chloridabhängig zu mTORC2 rekrutiert. Verwandte Referenzen: PMID:33964204, PMID:36373794
• Eine nierenspezifische, kinasedefekte Isoform von WNK1 fungiert als dominant-negativer Regulator der vollständigen Kinase und spielt eine Schlüsselrolle bei der renalen Natrium-Kalium-Bilanz. Verwandte Referenzen: PMID:14645531
• Subzellulär lokalisiert sich WNK1 im Zytoplasma, Zellkern und der mitotischen Spindel, was mit seinen Rollen bei Signalgebung, Genexpression und Zellteilung übereinstimmt.
• WNK1 ist weit verbreitet exprimiert, mit den höchsten Gehalten in Hoden, Herz, Niere und Skelettmuskel; eine starke Expression findet sich auch in Hinterwurzelganglien und Rückenmark. Die nierenspezifische Isoform ist auf den distalen konvolutierten Tubulus und den Verbindungstubulus des Nephrons beschränkt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid entsprechend der Aminosäuren 1-100 von humanem WNK1. Diese N-terminale Region kann konserviert sein; Kreuzreaktivität mit Maus ist bestätigt. Validieren Sie den Antikörper in Ihrem spezifischen Modellsystem.
• Beachten Sie bei Western Blots das hohe Molekulargewicht von ~251 kDa. Verwenden Sie ein SDS-PAGE-Gel mit niedrigem Prozentanteil (z. B. 6-8%) und verlängerte Transferzeiten (z. B. über Nacht bei 30 V), um einen effizienten Transfer von Proteinen mit hohem Molekulargewicht sicherzustellen.
• Für ELISA-Anwendungen erwägen Sie die Verwendung des Immunogenpeptids als Positivkontrolle, um die Antikörperbindung zu beurteilen und Assaybedingungen festzulegen.

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