Anti-WIPI1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q5MNZ9

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: WIPI1-Funktion und -Lokalisierung

• Proteinidentität und -familie: WIPI1 (WD-Repeat-Domäne Phosphoinositid-interagierendes Protein 1), auch als Atg18-Protein-Homolog oder WIPI 49 kDa bezeichnet, gehört zur WIPI-Familie von WD40-Repeat-Proteinen, die mit Phosphoinositiden interagieren. Diese Repeats sind für seine Lipidbindungs- und autophagen Funktionen essentiell.
• Kernfunktion in der Autophagie: WIPI1 ist eine Schlüsselkomponente der Autophagie-Maschinerie, die für die Bildung von Autophagosomen verantwortlich ist, die zytoplasmatische Fracht zu Lysosomen zum Abbau transportieren. Es bindet Phosphatidylinositol-3-phosphat (PtdIns3P) und wird zum endoplasmatischen Retikulum rekrutiert, um die Phagophor-Assemblierung zu nukleieren (PubMed:15602573, PubMed:20114074, PubMed:20484055). Verwandte Referenzen:
  • PMID:15602573
  • PMID:20114074
  • PMID:20484055
• Positionierung im Signalweg: WIPI1 wirkt stromabwärts von ULK1 und PI3-Kinasen und erkennt auf ER-Membranen erzeugtes PtdIns3P. Es unterstützt dann WIPI2 bei der Rekrutierung des ATG12-ATG5-ATG16L1-Komplexes, der direkt die Elongation der neu entstehenden autophagosomalen Membran antreibt. Diese Funktion ist sowohl für hunger- als auch für kalziuminduzierte Autophagie und für Mitophagie kritisch (PubMed:28561066). Verwandte Referenzen:
  • PMID:28561066
• Lipidtransfer und Komplexbildung: Zusammen mit WDR45/WIPI4 verstärkt WIPI1 die Assoziation von ATG2-Proteinen (ATG2A oder ATG2B) mit PI3P-reichen Membranen und fördert so den Lipidtransfer für die Autophagosomen-Expansion (PubMed:31271352). Verwandte Referenzen:
  • PMID:31271352
• Xenophagie und antimikrobielle Abwehr: WIPI1 beteiligt sich an der selektiven Autophagie von Pathogenen, wie z.B. Staphylococcus aureus, indem es Bakterien in WIPI1-positiven, autophagosom-ähnlichen Vesikeln einschließt, die für die lysosomale Zerstörung bestimmt sind (PubMed:22829830). Verwandte Referenzen:
  • PMID:22829830
• Nicht-autophage Rollen: Über die kanonische Autophagie hinaus reguliert WIPI1 die Melanosomenreifung und die Transkription melanogener Enzyme, ein Prozess, der unabhängig von hungerinduzierten Signalwegen ist (PubMed:21317285). Es könnte auch am Trafficking des Mannose-6-phosphat-Rezeptors beteiligt sein (PubMed:15020712). Verwandte Referenzen:
  • PMID:21317285
  • PMID:15020712
• Gewebeverteilung und subzelluläre Lokalisierung: WIPI1 ist ubiquitär exprimiert, mit höchsten Leveln in Skelettmuskel, Herz, Hoden, Pankreas und Plazenta, und ist in vielen Tumorzelllinien hochreguliert. Es lokalisiert zum trans-Golgi-Netzwerk, Endosomen, Clathrin-beschichteten Vesikeln und präautophagosomalen Strukturen und assoziiert auch mit dem Zytoskelett.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogendesign: Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 187-446 von humanem WIPI1, eine Region, die mehrere WD40-Repeats enthält. Dieser zentrale Teil ist über Spezies hinweg konserviert, was mit der beobachteten Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte übereinstimmt.
• Western Blotting (WB): Angesichts der hohen Expression von WIPI1 in Muskel, Herz und Hoden sind Gewebelysate aus diesen Quellen wahrscheinlich geeignete positive Kontrollen. Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt ~49 kDa, aber zusätzliche Banden aufgrund von alternatives Spleißen oder posttranslationalen Modifikationen können auftreten. Es ist ratsam, einen Blockierungsschritt einzufügen und die Spezifität mittels siRNA- oder Knockout-Kontrollen zu validieren.
• ELISA-Anwendung: Dieser Antikörper kann in indirekten ELISA-Formaten verwendet werden. Für die Entwicklung eines Sandwich-ELISA sollte die Paarung mit einem monoklonalen Capture-Antikörper, der für ein nicht-überlappendes Epitop spezifisch ist, in Betracht gezogen werden. Validieren Sie mit rekombinantem WIPI1-Protein (wie dem Immunogen) oder Zellysaten aus hoch exprimierenden Zellen.
• Kreuzreaktivität und Spezieskonsistenz: Die berichtete Kreuzreaktivität mit Human, Maus und Ratte impliziert, dass die erkannten Epitop(e) konserviert sind. Dennoch werden Pilot-Western Blots mit Lysaten aller drei Spezies empfohlen, um die Reaktivität und Bandenmuster zu bestätigen.

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