Anti-VPS4A Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9UN37

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: VPS4A-Funktion und Lokalisierung

• Vakuoläres Protein-Sortierung-assoziiertes Protein 4A (VPS4A) ist eine AAA-ATPase, die ATP-Hydrolyse nutzt, um ESCRT-III-Komplexe zu zerlegen, die für Membranfissionsereignisse im endosomalen Weg essentiell sind.
• Es wird für die Bildung von multivesikulären Körpern (MVB) und die Sortierung intraluminaler Vesikel (ILV) benötigt; VPS4A verteilt ESCRT-III-Komponenten für die Wiederverwendung ins Zytoplasma um und reguliert so die Endosomengröße, die Organisation des primären Ziliums und den Verschluss der Kernhülle während der Anaphase (PubMed:33186545). Verwandte Referenzen: PMID:33186545
• Spielt eine zentrale Rolle im Abscissionsschritt der Zytokinese; wird von ZFYVE19/ANCHR und CHMP4C am Midbody zurückgehalten, bis der Checkpoint beendet ist, die Freisetzung von VPS4A löst dann die Membranspaltung aus (PubMed:24814515). Verwandte Referenzen: PMID:24814515
• Vermittelt die exosomale Freisetzung von SDCBP, CD63 und Syndecan und verbindet so den ESCRT-Mechanismus mit der Exosomen-Biogenese (PubMed:22660413). Verwandte Referenzen: PMID:22660413
• Kritisch für die normale Erythroblasten-Zytokinese und Erythropoese; Mutationen sind mit kongenitaler dyserythropoetischer Anämie assoziiert (PubMed:33186543). Verwandte Referenzen: PMID:33186543
• Zusammen mit dem ESCRT-Mechanismus ist VPS4A an topologisch ähnlichen Membranfissionsereignissen beteiligt, die von umhüllten Viren (z.B. HIV-1) für das Budding kapert werden.
• Subzellulär lokalisiert an Spätendosomen-Membranen, dem Midbody, dem Zytoplasma und dem mitotischen Spindelapparat.
• Ubiquitär exprimiert, mit Verbindungen zu Krankheitsvarianten einschließlich Katarakten, hereditärer hämolytischer Anämie und intellektueller Beeinträchtigung (wie in UniProt-Keywords aufgeführt).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Resten 1-120 des humanen VPS4A, einer N-terminalen Region; dies kann die Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-Orthologen erleichtern.
• Als polyklonaler Antikörper ermöglicht er im Allgemeinen eine robuste Detektion in denaturierenden (WB) und nativen (IHC-P, IF/ICC) Anwendungen; die optimalen Arbeitsverdünnungen sollten jedoch empirisch für jeden Assay ermittelt werden.
• Für Western Blot wird ein erwartetes Band von etwa 49 kDa beobachtet; verwenden Sie Ganzzell- oder Gewebelysate, die VPS4A exprimieren.
• Für IHC-P und IF/ICC validieren Sie die Spezifität mit geeigneten positiven und negativen Kontrollen und optimieren Sie die Antigen-Retrieval- oder Permeabilisierungsbedingungen.
• Für ELISA erwägen Sie die Kombination dieses Antikörpers mit anderen VPS4A-Antikörpern, um nach Validierung einen Sandwich-Assay aufzubauen.
• Da VPS4A während der Zytokinese am Midbody lokalisiert ist, kann die Synchronisierung von Zellen in der späten Mitose oder die Anreicherung von Midbody-Strukturen die Detektion für IF/ICC verbessern.
• Da VPS4A ubiquitär exprimiert wird, überprüfen Sie in RNAi/CRISPR-Experimenten die Effizienz des Knockdowns oder Knockouts, um die Spezifität zu bestätigen.

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