Anti-Vinculin monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, ELISA - P18206

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Vinculin-Funktion und -Lokalisierung

• Vinculin ist ein hochkonserviertes Actin-bindendes Protein, das Integrine und Cadherine mit dem Actin-Zytoskelett verbindet und eine Schlüsselrolle sowohl bei der Zell-Matrix- als auch bei der Zell-Zell-Adhäsion spielt.
• Eine muskelspezifische Isoform, bekannt als Metavinculin (MV), entsteht durch alternatives Spleißen und enthält ein zusätzliches Exon; sie wird vorwiegend im Herzmuskel und Skelettmuskel exprimiert.
• Vinculin lokalisiert sich an Zell-Matrix-Fokaladhäsionen, Zell-Zell-Adhärenskontakten und der perinukleären Region sowie an spezialisierten Strukturen wie Podosomen und Sarkolemma.
• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Palmitoylierung, die seine Aktivierung, Proteininteraktionen und Membranzielierung regulieren.
• Vinculin wirkt als Mechanosensor; spannungsinduzierte Konformationsänderungen exponieren kryptische Bindungsstellen für Talin und F-Actin und stärken so die Adhäsionskomplexe.
• Als Schlüsselkomponente des Cadherin-Catenin-Komplexes moduliert Vinculin die Oberflächenexpression von E-Cadherin und verstärkt das Mechanosensing an Adhärenskontakten, was die Gewebemorphogenese und Homöostase beeinflusst.
• In Übereinstimmung mit seinen wesentlichen Rollen bei der Adhäsion und Mechanotransduktion sind Mutationen im VCL-Gen mit dilatativer Kardiomyopathie (CMD1W) und hypertropher Kardiomyopathie (CMH15) assoziiert.
• Darüber hinaus nimmt Vinculin an Zellmorphologie, Migration und Invasion teil, was durch seine Rekrutierung an Podosomen und seinen Einfluss auf die Lamellipodiendynamik belegt wird.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das dem C-terminalen Bereich (aa800-900) von menschlichem Vinculin entspricht; dieser Bereich ist über Mensch, Maus und Ratte hinweg konserviert, was die berichtete Kreuzreaktivität erklärt.
• Für Western Blots wandert Vinculin mit einer scheinbaren molekularen Masse von ~124 kDa; Verwenden Sie geeignete Gelkonzentrationen (z. B. 8 % SDS-PAGE) und überprüfen Sie die Transfer-Effizienz mittels Totalprotein-Färbung.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF-P) sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen gewählt werden, die die Architektur der Fokaladhäsionen und Adhärenskontakte erhalten (z. B. 4 % PFA gefolgt von 0,1 % Triton X-100). Eine Co-Färbung mit Paxillin- oder F-Actin-Markern kann die Lokalisierung bestätigen.
• Bei der Durchführung von ELISA titrieren Sie den Antikörper gegen das Immunogen-Peptid und das native Protein, um die optimalen Konzentrationen zu ermitteln; bei hohem Hintergrund in komplexen Matrizes kann eine Kreuzadsorption evaluiert werden.
• Da Vinculin ein ubiquitäres Protein ist, ist die Einbeziehung geeigneter Ladungskontrollen (z. B. GAPDH, β-Actin) für quantitative Analysen unerlässlich.
• Für Studien mit Muskelgewebe beachten Sie, dass der Antikörper sowohl Vinculin- als auch Metavinculin-Isoformen erkennen kann; Letztere läuft etwas höher bei etwa 150 kDa.

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