Anti-ULK4 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q96C45

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ULK4

• ULK4 ist eine Pseudokinase aus der Familie der Unc-51-ähnlichen Kinasen, auch bekannt als FAM7C1 und REC01035. Sie zeichnet sich durch das Fehlen katalytischer Kinaseaktivität aus und fungiert stattdessen als molekularer Adapter.
• Im Hedgehog-Signalweg wirkt ULK4 am Primärzilium und vermittelt die Assoziation zwischen der STK36-Kinase und dem Transkriptionsfaktor GLI2. Dies fördert die Phosphorylierung von GLI2 und anschließende Freisetzung aus der SUFU-Inhibition, was die nukleäre Translokation von GLI2 und die Aktivierung von Zielgenen ermöglicht. Verwandte Referenzen: PMID:38096226
• ULK4 ist in Zellprojektionen lokalisiert, insbesondere im Zilium, was mit seiner Rolle bei der ziliären Hedgehog-Signalübertragung übereinstimmt.
• Auf Proteinebene wird ULK4 überwiegend im Gehirn nachgewiesen, insbesondere bei postmitotischen Neuronen einschließlich GABAergen Neuronen, und fehlt in Astrozyten.
• Das Protein verfügt über eine ATP-bindende Domäne und Nukleotidbindungskapazität, obwohl seine Einstufung als Pseudokinase eine nicht-kanonische Nukleotidverwendung impliziert.
• Es enthält mehrere Wiederholungsregionen und wird, wie durch Proteomik identifiziert, phosphoryliert, was auf regulatorische posttranslationale Modifikationen hindeutet.
• Die Adapterfunktion von ULK4 bei der GLI2-Aktivierung ist entscheidend für eine korrekte Hedgehog-Signalübertragung, die die embryonale Entwicklung, die Erhaltung von Stammzellen und die Geweberegeneration steuert.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Beim Western Blot sollten Sie aufgrund der hohen Molekularmasse von ULK4 (ca. 142 kDa) ein Polyacrylamidgel mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6-8 %) mit verlängerten Transferzeiten verwenden, um einen effizienten Proteintransfer sicherzustellen.
• Bei Immunfluoreszenz oder Immunzytochemie ist ULK4 an Zilien lokalisiert – optimieren Sie daher Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen, um die Zilienstruktur zu erhalten, und bestätigen Sie die Kolokalisierung mit ziliären Markern wie acetyliertem Tubulin oder Arl13b.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität in Ihrem Probensystem, indem Sie bekannte ULK4-exprimierende Zelllinien oder Gewebe (z. B. neuronale Kulturen oder Gehirnschnitte) verwenden und nach Möglichkeit Knockdown/Knockout-Kontrollen durchführen.
• Als polyklonaler Antikörper kann die Chargenkonsistenz variieren. Wir empfehlen, jede neue Charge zu titrieren und bei jedem Experiment geeignete Positiv- und Negativkontrollen einzubeziehen.
• Stellen Sie bei ELISA-Anwendungen sicher, dass das rekombinante Immunogen oder das vollständige ULK4-Protein zur Beschichtung verwendet wird, um die Reaktivität zu bestätigen und die optimale Arbeitsverdichtung zu bestimmen.

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