Anti-Ubiquitin Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – P0CG47

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Polyubiquitin-B

• Polyubiquitin-B, kodiert durch das UBB-Gen, ist ein Ubiquitin-Vorläufer, der nach Prozessierung mehrere Ubiquitin-Einheiten freisetzt.
• Ubiquitin liegt entweder kovalent an Zielproteine gebunden (Mono-Ubiquitin oder Polyubiquitin-Ketten) oder frei (unverankert) vor; Polyubiquitin-Ketten werden über verschiedene Lysin-Reste (z. B. Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) oder über das initiierende Methionin verknüpft, wobei jede Verknüpfung unterschiedliche zelluläre Funktionen hat.
• Lys-48-verknüpfte Polyubiquitin-Keten markieren Proteine für den proteasomalen Abbau, während Lys-63-verknüpfte Ketten nicht-abbaubare Signalwege wie Endozytose, DNA-Schadensantwort und NF-kappa-B-Aktivierung vermitteln.
• Weitere Verknüpfungstypen sind: Lys-6 (DNA-Reparatur), Lys-11 (ERAD und Zellzyklusregulation), Lys-29 (proteotoxische Stressantwort und Zellzyklus), Lys-33 (Kinase-Modifizierung) und lineare Ketten (Zellsignalisierung).
• Unverankertes freies Polyubiquitin spielt ebenfalls eine Rolle bei der Proteinkinase-Aktivierung und in Signalwegen.
• Ubiquitin ist überwiegend im Zytoplasma und Zellkern lokalisiert und kommt außerdem auf der äußeren mitochondrialen Membran vor.
• Posttranslationale Modifikationen von Ubiquitin umfassen Phosphorylierung und ADP-Ribosylierung.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Dieser Antikörper wurde mit einem rekombinanten Fusionsprotein hergestellt, das das gesamte volllängen menschliche Ubiquitin (Aa 1-228) abdeckt – dies umfasst alle wichtigen Reste für die Erkennung sowohl von monomeren als auch von polyubiquitinen Formen.
• Für Western Blot (WB) beträgt das vorausgesagte Molekulargewicht 26 kDa; aufgrund der Konjugation von Ubiquitin an verschiedene Zielproteine kann jedoch eine Reihe von Banden bei höheren Molekulargewichten beobachtet werden, die polyubiquitinierte Proteine widerspiegeln.
• Bei der Durchführung der Immunhistochemie (IHC-P) empfehlen wir die Anwendung einer Standard-Antigenreparaturmethode und die Validierung der Färbespezifität mit geeigneten positiven und negativen Kontrollgeweben.
• Die (vorausgesagte) Reaktivität des Antikörpers mit einem breiten Spektrum von Spezies deutet auf konservierte Epitope hin; überprüfen Sie die Kreuzreaktivität in Ihrem spezifischen experimentellen System, wenn Sie andere Spezies als Mensch, Maus oder Ratte verwenden.
• Für ELISA-Anwendungen kann das rekombinante Immunogen als Positivkontrolle zur Bestimmung der Assay-Empfindlichkeit und Spezifität dienen.

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