Anti-UBE2C Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - O00762

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: UBE2C-Funktion und Lokalisierung

• UBE2C (UBCH10) ist ein Mitglied der Ubiquitin-konjugierenden Enzym (E2)-Familie, das für die Aufnahme von Ubiquitin vom E1-Enzym und dessen Transfer auf Substrate verantwortlich ist.
• Das Protein ist ein essentieller Kofaktor des Anaphase-fördernden Komplexes/Zyklosoms (APC/C), einer kritischen E3-Ubiquitin-Ligase, die den mitotischen Fortschritt reguliert, indem sie Schlüsselsubstrate für den proteasomalen Abbau markiert.
• UBE2C katalysiert hauptsächlich 'Lys-11'-verknüpfte Polyubiquitinketten, eine nicht-kanonische Verknüpfung, die für die APC/C-Substraterkennung und den anschließenden Abbau entscheidend ist.
• Zusätzlich zu Lys-11-Ketten kann UBE2C in vitro auch 'Lys-48'-verknüpfte Polyubiquitinierung vermitteln, was seine Vielseitigkeit bei der Ubiquitinkettenbildung unterstreicht.
• Alternatives Spleißen des UBE2C-Gens kann mehrere Transkriptvarianten erzeugen, die möglicherweise Isoformen mit unterschiedlichen regulatorischen Eigenschaften hervorbringen.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Acetylierung, werden durch UniProt-Schlüsselwörter angezeigt und deuten auf eine dynamische Regulation der UBE2C-Aktivität während des Zellzyklus hin.
• Das Protein ist über Spezies hinweg hochkonserviert, was die Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-Orthologen ermöglicht, wie durch die Antikörpervalidierung bestätigt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Vollängen-Immunogen (aa 1-179) kann die Erkennung aller UBE2C-Isoformen ermöglichen; daher könnten in einigen Geweben oder Zellzuständen Banden mit leicht unterschiedlichem Molekulargewicht beobachtet werden.
• Für Western Blotting verwenden Sie Lysate von mitotisch arretierten Zellen (z.B. Nocodazol-Behandlung) als positive Kontrolle, da die UBE2C-Spiegel während der Mitose ihren Höhepunkt erreichen. Eine Bande nahe 20 kDa ist zu erwarten.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Sie eine hitzeinduzierte Antigendemaskierung mit Citratpuffer (pH 6,0) in Betracht ziehen und in bekannten positiven Geweben, wie hoch proliferativen Tumoren oder Hoden, validieren.
• Bei der Immunpräzipitation (IP) kann der polyklonale Antikörper UBE2C und seine Interaktionspartner anreichern; Vorreinigung mit Kontroll-IgG wird empfohlen, um unspezifische Bindung zu reduzieren.
• Für ELISA optimieren Sie die Konzentration des Beschichtungsantigens und die Antikörperverdünnung unter Verwendung von rekombinantem UBE2C-Protein als Standard; beachten Sie, dass polyklonale Antikörper eine leichte Charge-zu-Charge-Variabilität aufweisen können.
• Schließen Sie immer relevante Kontrollen (z.B. UBE2C-Knockout-Lysate) ein, um die Spezifität zu bestätigen, insbesondere bei der Arbeit mit Proben, in denen die UBE2C-Expression niedrig oder reguliert ist.

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