Anti-TriMethyl-Histon H3-K9 (Q16695/P68431) Kaninchen monoklonaler Antikörper für Epigenetik

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3 Funktion und Lokalisierung

• Funktion: Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin wickelt und kompaktiert, um Transkription, DNA-Reparatur, Replikation und chromosomale Stabilität zu regulieren. Posttranslationale Modifikationen von Histonen, bekannt als Histon-Code, modulieren die Chromatinstruktur und Genexpression.
• Subzelluläre Lokalisierung: Vorwiegend im Zellkern lokalisiert und während des gesamten Zellzyklus mit Chromosomen assoziiert.
• Gewebespezifität: Die Histon H3-Variante H3.1t (Q16695) wird spezifisch in testikulären Zellen exprimiert, während das kanonische H3.1 (P68431) ubiquitär in allen Geweben exprimiert wird.
• Posttranslationale Modifikationen: Histon H3 unterliegt einer Vielzahl kovalenter Modifikationen, wobei Lysin 9 eine wichtige regulatorische Stelle ist. Lysin 9 kann Citrullinierung (Umwandlung von Arginin zu Citrullin) PMID:15345777 PMID:16567635 und symmetrisches Dimethylarginin erfahren. Zusätzlich ist die Trimethylierung von Lysin 9 (H3K9me3) eine gut charakterisierte repressive Chromatin-Markierung. Dieser Antikörper erkennt spezifisch Histon H3, das an Lysin 9 trimethyliert ist. Verwandte Referenzen: PMID:15345777, PMID:16567635

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immundesign: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches trimethyliertes Peptid erzeugt, das Lysin 9 von humanem Histon H3 umfasst. Bei der Verwendung dieses Antikörpers sollte die Spezifität durch Testen gegen unmodifiziertes H3-Peptid oder Peptide mit alternativen Modifikationen (z.B. Monomethyl, Dimethyl, Acetyl) validiert werden, um die Selektivität für den trimethylierten Zustand zu bestätigen.
• Western Blot (WB) und Dot Blot (DB): Für WB Standard-Histon-Extraktionsprotokolle (Säureextraktion oder Hochsalz) verwenden, um basische Proteine anzureichern. Ausreichende Blockierung und Antikörperverdünnung sicherstellen, um unspezifische Bindung zu minimieren. Für DB die Kreuzreaktivität gegen andere Histonmodifikationen bei Bedarf überprüfen.
• Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC): Permeabilisierungs- und Fixierungsbedingungen optimieren, um die Kernmorphologie und Antigenzugänglichkeit zu erhalten. Co-Färbung mit DAPI kann helfen, die Kernlokalisation zu bestätigen.
• ELISA: Für Hochdurchsatz-Screening verwenden; in Betracht ziehen, Platten mit synthetischen methylierten vs. nicht-methylierten Peptiden zu beschichten, um die Spezifität zu bewerten.
• Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP, ChIP-seq) und CUT&Tag: Dieser Antikörper ist geeignet für die ChIP-basierte Anreicherung von H3K9me3-markiertem Chromatin. Vernetzungs-ChIP (X-ChIP) oder native ChIP (N-ChIP) können verwendet werden; mit positiven und negativen Kontroll-Genomloci (z.B. Heterochromatin vs. aktive Promotoren) validieren. Für CUT&Tag veröffentlichten Protokollen für Low-Input- oder Einzelzellanwendungen folgen. Den Antikörper in Ihrem relevanten Proben-System validieren, bevor groß angelegte Experimente durchgeführt werden.

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