Anti-Topo IIα polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P11388

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Topo IIα-Funktion und Lokalisierung

• DNA-Topoisomerase 2-alpha (Topo IIα), kodiert durch das TOP2A-Gen, ist ein kritisches ATP-abhängiges Enzym, das die DNA-Topologie moduliert, indem es doppelsträngige DNA vorübergehend spaltet und wieder verknüpft, wodurch der Durchtritt eines Duplex durch einen anderen ermöglicht wird (PubMed:17567603, PubMed:18790802, PubMed:22013166). Verwandte Referenzen: PMID:17567603 PMID:18790802 PMID:22013166
• Topo IIα ist vorwiegend im Zellkern lokalisiert, mit Anreicherung im Nukleoplasma und Nukleolus; es wird auch im Zytoplasma nachgewiesen, insbesondere während der Zellteilung.
• Es wird weit verbreitet in proliferativen Geweben wie Tonsillen, Milz, Lymphknoten, Thymus und Hoden exprimiert und ist insbesondere in hochgradigen Lymphomen, Plattenepithelkarzinomen der Lunge und Seminomen überexprimiert (PubMed:9155056). Verwandte Referenzen: PMID:9155056
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, regulieren die Aktivität, Stabilität und zelluläre Lokalisierung von Topo IIα.
• Das Protein zeigt alternatives Spleißen, was zu mehreren Isoformen mit Molekulargewichten im Bereich von 174 bis 182 kDa führt.
• Topo IIα könnte auch an der Regulation des zirkadianen Rhythmus beteiligt sein, indem es die Periodenlänge der BMAL1-Transkriptionsoszillation beeinflusst (By similarity).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid aus der C-terminalen Region (aa 1431-1531), was eine hohe Spezifität für Topo IIα bieten kann.
• Für den Western Blot sollten aufgrund der großen Proteingröße (~174-182 kDa) die Proteintransferbedingungen optimiert werden (z. B. niedrigerer Methanolanteil, verlängerte Transferzeit) und die Banden mit geeigneten Molekulargewichtsstandards verifiziert werden.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten Antigen-Retrieval-Protokolle (z. B. hitzeinduzierte Epitop-Demaskierung) berücksichtigt und der Antikörper titriert werden, um den Hintergrund zu minimieren.
• Für ELISA-Anwendungen kann dieser polyklonale Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; die Paarung mit einem monoklonalen Antikörper kann die Spezifität in Sandwich-Assays erhöhen.
• Die Kreuzreaktivität ist für humane Proben validiert; für andere Spezies sollte die Sequenzhomologie des Immunogens vor der Verwendung überprüft werden.

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