Anti-TNF-α Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01375

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TNF-α-Funktion und -Lokalisierung

• TNF-α ist ein homotrimeres Zytokin, das sowohl als 26 kDa Typ-II-Transmembran-Vorstufe als auch als 17 kDa lösliche Form, die durch proteolytische Spaltung entsteht, existiert. Seine Struktur umfasst eine intrazelluläre Domäne, eine einzelne Transmembran-Helix und eine extrazelluläre C-terminale Rezeptorbindedomäne.
• Codiert durch das TNF-Gen (Alias TNFA, TNFSF2) auf dem menschlichen Chromosom 6 ist TNF-α ein prototypisches Mitglied der Tumornekrosefaktor-Superfamilie, die 19 Liganden umfasst, die diverse biologische Prozesse regulieren.
• TNF-α signalisiert primär über zwei Rezeptoren, TNFRSF1A/TNFR1 und TNFRSF1B/TNFBR. Es wird hauptsächlich von aktivierten Makrophagen sezerniert und entfaltet pleiotrope Effekte, einschließlich der Induktion von Apoptose in bestimmten Tumorzelllinien, Fieber (Pyrogenität) und Kachexie.
• Bei rheumatoider Arthritis beeinträchtigt TNF-α die Funktion regulatorischer T-Zellen durch Hochregulierung der Proteinphosphatase 1 (PP1), die die Schlüsselreststelle Ser-418 von FOXP3 dephosphoryliert, was zu einer funktionellen Unfähigkeit der Tregs führt. Verwandte Referenzen: PMID:23396208
• TNF-α wirkt als Schlüsselmediator des Zelltods in der Antikrebswirkung von BCG-stimulierten Neutrophilen in Kombination mit einem DIABLO/SMAC-Mimetikum, wie in der Blasenkrebszelllinie RT4v6 gezeigt. Verwandte Referenzen: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Synergistisch mit IL-1B und IL-6 induziert TNF-α die VEGF-Produktion und fördert damit die Angiogenese. Verwandte Referenzen: PMID:12794819
• Die subzelluläre Lokalisierung ist dynamisch: Das全长-Protein befindet sich an der Zellmembran, während das gespaltene Ektodomäne sezerniert wird. Die intrazelluläre Domäne (ICD) kann in den Zellkern translozieren und die IL-12-Produktion in dendritischen Zellen stimulieren.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Myristoylierung, Phosphorylierung und Disulfidbrückenbildung, die alle für die richtige Faltung, Aktivität und Stabilität entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen Region (aa 134–233) von humanem TNF-α, die innerhalb des reifen, sezernierten Teils liegt. Der resultierende polyklonale Antikörper kann sowohl die membrangebundene als auch die lösliche Form des Zytokins erkennen.
• Beim Western Blot repräsentiert eine Bande bei ca. 26 kDa die全长-Transmembran-Vorstufe, während eine Bande bei ~17 kDa die abgespaltene lösliche Form anzeigt. Verwenden Sie Lysate von LPS-stimulierten Makrophagen oder Monozyten als positive Kontrolle.
• In der Immunhistochemie benötigen Paraffin-eingebettete Schnitte möglicherweise eine hitzevermittelte Antigen-Retrieval. Erwägen Sie die Testung von bekanntem TNF-α-reichem Gewebe wie entzündeten Lymphknoten oder rheumatischer Synovialmembran.
• Bei der Anwendung von Immunfluoreszenz oder ELISA validieren Sie die Antikörperspezifität unter Verwendung von rekombinantem TNF-α oder relevanter positiver/negativer Zelllinien, die das Ziel exprimieren.

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