Anti-TFAM Kaninchen-polyklonale Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – Q00059

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von TFAM

• TFAM (Transkriptionsfaktor A, mitochondrial), auch bekannt als MtTF1, TCF-6 und TCF6L2, ist ein wichtiger kernkodierter mitochondrialer Transkriptionsfaktor, der die mitochondriale Genexpression reguliert.
• Es bildet mit TFB2M und POLRMT den mitochondrialen Transkriptionsinitiationskomplex, der für die basale Transkription von mitochondrialer DNA (mtDNA) essenziell ist.
  Verwandte Referenzen: PMID:29149603
• TFAM bindet an den Leichtstrang- und den HSP1-Promotor, biegt die DNA über seine HMG-Box-Domänen zu einer U-Form, um POLRMT zu rekrutieren und die Transkriptionsinitiation zu erleichtern.
  Verwandte Referenzen: PMID:22037172, PMID:1737790
• Neben der Transkription ist TFAM entscheidend für die Erhaltung und Verpackung von mtDNA; es verdichtet mtDNA zu Nukleoiden, und seine Dosis reguliert die mtDNA-Kopienzahl streng.
  Verwandte Referenzen: PMID:19304746, PMID:22841477, PMID:22037171
• In Zusammenarbeit mit TFB2M ermöglicht TFAM die Öffnung des Promotors und das Einfangen des nicht matrizenbildenden DNA-Strangs – ein entscheidender Schritt für eine genaue Transkription.
  Verwandte Referenzen: PMID:20410300
• TFAM lokalisiert in der mitochondrialen Matrix und in Nukleoiden, wo es auch eine Rolle bei dem Aufwindem und der Organisation von mtDNA spielt.
• Es durchläuft alternatives Spleißen und Phosphorylierung; krankheitsassozierte Varianten sind mit primären mitochondrialen Erkrankungen verbunden.
• Als Mitglied der HMGB-Familie bindet TFAM mit seinen tandemartigen HMG-Boxen an mtDNA, biegt und schleift sie und trägt so zur Nukleoidarchitektur bei.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region 1–220 von menschlichem TFAM, die die tandemartigen HMG-Box-Domänen enthält; daher ist zu erwarten, dass der Antikörper volllanges TFAM erkennt.
• Für Western Blotting empfehlen sich mitochondrial angereicherte Lysate für eine optimale Detektion; das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt ~29 kDa, aber posttranslationale Modifikationen können eine Verschiebung verursachen.
• Für Immunfluoreszenz/IF und ICC ist eine punktierte mitochondriale Färbung zu erwarten; eine Co-Färbung mit einem mitochondrialen Marker wird empfohlen, um die Lokalisation zu bestätigen.
• Bei der Durchführung von ELISA titrieren Sie den Antikörper gegen rekombinantes TFAM oder Zelllysate, um die optimalen Arbeitsverdünnungen zu ermitteln.
• Aufgrund der hohen Sequenzkonservierung bei Mensch, Maus und Ratte ist Kreuzreaktivität wahrscheinlich, validieren Sie den Antikörper aber in Ihrem Modellsystem.

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