Kaninchen-monoklonaler Anti-TdT-Antikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA – P04053

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von TdT

• Die terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT), kodiert durch das DNTT-Gen, ist eine template-unabhängige DNA-Polymerase, die die zufällige Addition von Desoxynukleosidtriphosphaten an das 3'-OH-Ende von DNA-Initiatoren katalysiert.
• TdT spielt eine entscheidende Rolle bei der V(D)J-Rekombination, indem es während der Reifung von B- und T-Lymphozyten nicht durch eine Vorlage vorgegebene (N-)Nukleotide an den Verbindungsstellen der Segmente der Immunglobulin-Schwerkette und der T-Zell-Rezeptor-Gene hinzufügt.
• Das Enzym benötigt für seine katalytische Aktivität zweiwertige Metallionen, beispielsweise Magnesium, wie durch die UniProt-Schlüsselwörter „Magnesium“ und „Metallbindung“ angezeigt wird.
• TdT ist überwiegend im Zellkern lokalisiert, wo es mit der Rekombinationsmaschinerie assoziiert ist, um die Diversität an den Verbindungsstellen zu erzeugen.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehört die Phosphorylierung, wie durch das Schlüsselwort „Phosphoprotein“ annotiert, die möglicherweise die Enzymaktivität oder Proteininteraktionen reguliert.
• Alternatives Spleißen des DNTT-Transkripts erzeugt mehrere Isoformen, wie durch das Schlüsselwort „Alternatives Spleißen“ angegeben, was möglicherweise die funktionelle Spezialisierung beeinflusst.
• Die dreidimensionale Struktur des Proteins wurde aufgeklärt (Schlüsselwort „3D-Struktur“) und liefert Einblicke in den molekularen Mechanismus der template-unabhängigen Nukleotidaddition.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 10–124 des humanen TdT, eine Region, die wahrscheinlich Antikörper hervorbringt, die das native Protein erkennen; ziehen Sie in Betracht, die Reaktivität mit endogenem TdT in relevanten Lymphozytenmodellen zu überprüfen.
• Beim Western Blot ist eine Bande bei ungefähr 58–59 kDa zu erwarten; validieren Sie den Nachweis in Kernextrakten aus Thymus oder Leukämiezelllinien, von denen bekannt ist, dass sie TdT exprimieren.
• Bei Immunfluoreszenz oder Immunhistochemie ist eine Färbung im Zellkern zu erwarten; berücksichtigen Sie geeignete Permeabilisierungsschritte und bestätigen Sie die Signalspezifität anhand TdT-negativer Proben oder Knockout-Kontrollen.
• Der Antikörper kann für die ELISA-basierte Quantifizierung von rekombinantem oder gereinigtem TdT geeignet sein; optimieren Sie das Beschichtungsantigen und das Nachweisformat für Ihr Assaysystem.

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