Anti-STIM1 Kaninchen PolymAb® für WB, IHC-P, IP, ELISA - Q13586

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: STIM1-Funktion und -Lokalisierung

• STIM1 wirkt als Ca²⁺-Sensor, der zwei wichtige einwärts gleichrichtende Ca²⁺-Kanäle an der Plasmamembran steuert: Ca²⁺-Release-activated Ca²⁺ (CRAC)-Kanäle und Arachidonat-regulierte Ca²⁺-selektive (ARC)-Kanäle, und spielt eine zentrale Rolle im Kalzium-Homöostase. Verwandte Referenzen: PMID:15866891 PMID:16005298 PMID:16208375

• Nach Erschöpfung der Ca²⁺-Speicher des endoplasmatischen Retikulums (ER) oligomerisiert STIM1 und transloziert von der ER-Membran zu ER-Plasmamembran-Junctions, wo es die CRAC-Kanaluntereinheiten ORAI1, ORAI2 und ORAI3 direkt aktiviert, um einen anhaltenden und oszillierenden Ca²⁺-Einstrom zu erzeugen. Verwandte Referenzen: PMID:16537481 PMID:32415068

• STIM1 ist an der Schmelzbildung beteiligt, was seine Rolle bei gewebsspezifischen Verkalkungsprozessen unterstreicht. Verwandte Referenzen: PMID:24621671

• Das Protein reguliert die Typ-I-Interferon-Antwort negativ, indem es den Signaladapter STING im endoplasmatischen Retikulum zurückhält, wodurch dessen Aktivierung und nachgelagerte Immunsignalierung verhindert werden. Verwandte Referenzen: PMID:30643259

• STIM1 ist ubiquitär in verschiedenen menschlichen Primärzellen und Tumorzelllinien exprimiert, was seine grundlegende Rolle in der Zellphysiologie unterstreicht.

• Subzellulär ist STIM1 in der Zellmembran, der Membran des endoplasmatischen Retikulums, dem Zytoplasma, dem Zytoskelett und dem sarkoplasmatischen Retikulum lokalisiert, was seiner dynamischen Shuttle-Funktion entspricht.

• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknöpfte Glykosylierung und Phosphorylierung, die seine Stabilität und Aktivität regulieren können. Das Protein enthält ein Signalpeptid, eine einzelne Transmembranhelix und eine zytoplasmatische Coiled-Coil-Domäne.

• Alternatives Spleißen generiert multiple Isoformen, die eine gewebsspezifische Expression oder unterschiedliche funktionelle Eigenschaften aufweisen können.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 530–685, einen Bereich innerhalb des zytoplasmatischen C-terminalen Segments von STIM1. Dieses Design kann die Erkennung des全长-Proteins und bestimmter Spleißvarianten begünstigen, könnte jedoch Isoformen verpassen, die diesen Bereich nicht enthalten. Validieren Sie dies in Ihrer Zielzelllinie oder Ihrem Gewebe.

• Beim Western Blotting wird ein dominantes Band bei ca. 77 kDa erwartet, obwohl zusätzliche Bänder aufgrund von Glykosylierung oder alternativem Spleißen auftreten können. Verwenden Sie geeignete Ladungskontrollen und bestätigen Sie die Spezifität mit Negativkontrollen (z. B. siRNA-Knockdown oder CRISPR-Knockout, falls verfügbar).

• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) müssen die Methode der Antigen-Retrieval und die Antikörperverdünnung optimiert werden, da die intrazelluläre Lokalisierung von STIM1 eine Permeabilisierung erfordern kann. Fügen Sie geeignete Isotypkontrollen ein und validieren Sie die Färbung mit bekannten positiven und negativen Geweben.

• Für die Immunpräzipitation (IP) inkubieren Sie den Antikörper vor der Aufnahme mit Protein A/G-Perlen und erwägen Sie eine Vernetzung, um Störungen durch schwere/leichte Ketten bei der nachgelagerten WB zu verhindern. Bestätigen Sie die Ko-Präzipitation bekannter Interaktionspartner wie ORAI1.

• Für ELISA titrieren Sie den Antikörper gegen das Immunogen oder Zellulysat, um optimale Beschichtungs- und Nachweisbedingungen zu ermitteln. Kombinieren Sie ihn mit einem passenden Nachweisantikörper oder einem konjugierten Sekundärantikörper für Sandwich-ELISA-Setups.

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