Anti-SQSTM1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q64337

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SQSTM1-Funktion und -Lokalisierung

• SQSTM1, auch bekannt als Sequestosom-1 oder p62, ist ein stressinduzierbares zytoplasmatisches Adapterprotein, das als selektiver Autophagie-Rezeptor fungiert, indem es ubiquitinierte Proteinaggregate mit der Autophagie-Maschinerie verbindet.
• Autophagie-Cargo-Erkennung: Als selektiver Autophagie-Rezeptor vermittelt SQSTM1 die Bindung von ubiquitiniertem Cargo an Autophagosomen. Es unterliegt einer Flüssig-Flüssig-Phasentrennung nach Bindung an ubiquitinierte Proteine über seine UBA-Domäne, bildet p62-Körper, die dann über die Interaktion seines LIR-Motivs mit ATG8-Familienproteinen zu Autophagosomen rekrutiert werden, was zum autophagischen Abbau des Cargos führt. Verwandte Referenzen: PMID:25723488, PMID:33397898
• Zytoprotektive Signalgebung: SQSTM1 interagiert mit KEAP1, sequestriert es in Einschlusskörper und verhindert so den KEAP1-vermittelten Abbau von NFE2L2/NRF2. Dies führt zur nukleären Akkumulation von NRF2 und der Expression von antioxidativen und zytoprotektiven Genen. Verwandte Referenzen: PMID:20173742, PMID:20421418, PMID:24011591
• NF-kappa-B-Signalwegregulation: SQSTM1 fungiert als Adapter, der die Interaktion zwischen TRAF6 und CYLD vermittelt und so die NF-kappa-B-Aktivierung in Reaktion auf Zytokine wie TNF, NGF und Interleukin-1 beeinflusst. Verwandte Referenzen: PMID:14960283, PMID:18382763
• Subzelluläre Lokalisierung: SQSTM1 lokalisiert zu zytoplasmatischen Aggregaten (p62-Körpern), Autophagosomen, späten Endosomen, Lysosomen und dem Zellkern (PML-Körpern). Es findet sich auch am endoplasmatischen Retikulum und an Myofibrillen-Sarkomeren, was seine vielfältigen Funktionen in der Proteinqualitätskontrolle und Signalgebung widerspiegelt.
• Posttranslationale Modifikationen und strukturelle Merkmale: Das Protein unterliegt Acetylierung, Phosphorylierung, Ubiquitinierung und Palmitoylierung und enthält Zinkfinger-Domänen. Diese Modifikationen regulieren seine Aktivität, Lokalisierung und Stabilität.
• Gewebeverteilung: SQSTM1 ist in Geweben weit verbreitet exprimiert, was mit seinen grundlegenden Rollen in der zellulären Homöostase und Stressantworten übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 250-350 von murinem SQSTM1, einer Region, die Teile der PB1-Domäne und Linker-Sequenzen umfassen kann. Die polyklonale Natur dieses Antikörpers kann mehrere Epitope erkennen, was ein robustes Signal im Western Blot (WB) liefert.
• Für WB ist eine Bande nahe 48 kDa zu erwarten, jedoch können aufgrund der Tendenz von SQSTM1, Aggregate zu bilden und posttranslationalen Modifikationen zu unterliegen, auch Spezies mit höherem Molekulargewicht auftreten. Um Aggregation zu minimieren, Proben vor der Elektrophorese in reduzierendem Ladebuffer erhitzen.
• Für ELISA sollte die Verwendung von rekombinantem SQSTM1-Protein oder des immunisierenden Peptids als Beschichtungsantigen in Betracht gezogen werden. Eine Titration sowohl des Antikörpers als auch des Antigens wird für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis empfohlen.
• Die Kreuzreaktivität mit humanem, murinem und ratten SQSTM1 wird durch Sequenzhomologie unterstützt; jedoch wird eine individuelle Validierung in der spezifischen Probe und Anwendung empfohlen.

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