Anti-Spike-Glykoprotein monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des Spike-Glykoproteins

• Das Spike-Glykoprotein (S) ist ein virales Fusionsprotein der Klasse I, das für die Vermittlung des Eintritts von SARS-CoV-2 in Wirtszellen verantwortlich ist.
• Das S-Protein bindet an die Wirtszelle durch Interaktion mit dem Angiotensin-Converting-Enzym-2 (ACE2)-Rezeptor und initiiert so die Infektion (PubMed:32142651, PubMed:32155444, PubMed:33607086). Zugehörige Referenzen: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Die proteolytische Spaltung an der S2/S2'-Stelle durch Wirtsproteasen TMPRSS2 oder Cathepsin L löst irreversible Konformationsänderungen aus, die zur Fusion der viralen und zellulären Membranen führen (PubMed:32142651, PubMed:32703818, PubMed:34159616, PubMed:34561887). Zugehörige Referenzen: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• Alternative Eintrittsrezeptoren beim Wirt sind Neuropilin-1/2 (NRP1/NRP2) und der Asialoglykoprotein-Rezeptor 1 (ASGR1), was die Tropismus für olfaktorische Epithelzellen und ACE2-unabhängige Signalwege erklären könnte (PubMed:33082294, PubMed:33082293, PubMed:34837059). Zugehörige Referenzen: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:34837059
• Das Protein enthält Coiled-Coil-Regionen, Disulfidbindungen und ist stark glykosyliert, was seiner Rolle als virales Hüll-Fusionsglykoprotein entspricht.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst die Virionmembran, das endoplasmatische Retikulum-Golgi-Zwischenkompartiment des Wirts und die Wirtszellmembran.
• Es trägt zur viralen Immunevasion bei, indem es angeborene Immunantworten des Wirts hemmt und der Tetherin (BST-2)-Restriktion entgegenwirkt.
• Die Stammdomäne von S enthält drei Scharniere, die der Kopfdomaäne unerwartete Orientierungsfreiheit verleihen, was wahrscheinlich die Rezeptorbindung unterstützt (PubMed:32817270). Zugehörige Referenzen: PMID:32817270

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen wurde gegen ein rekombinantes Fragment des 3CLpro-Proteins hergestellt; eine mögliche Kreuzreaktivität mit dem Spike-Glykoprotein (P0DTC2) sollte in Ihrem spezifischen Assay-Kontext validiert werden.
• Für Western Blotting (WB) ist unter reduzierenden Bedingungen eine Bande in der Nähe von 141 kDa zu erwarten; optimieren Sie die Probenvorbereitung und Antikörperverdünnung, um unspezifische Bindung zu minimieren.
• Für Immunfluoreszenz (IF/ICC) empfehlen wir eine Fixierung mit 4% Paraformaldehyd und Permeabilisierung mit 0,1 % Triton X-100; fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um die Spezifität der Färbung zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen titrieren Sie sowohl Antikörper als auch Antigen, um ein robustes Signal-Rausch-Verhältnis zu erzielen; die Kreuzreaktivität mit anderen koranaviralen Proteinen muss möglicherweise evaluiert werden.

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