Anti-SPAG5-Polyklonaler Antikörper für IF/ICC, ELISA - Q96R06

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SPAG5-Funktion und -Lokalisierung

• SPAG5 (Sperm-associated antigen 5), auch bekannt als Astrin, Deepest und MAP126, ist ein 134 kDa Protein, das stark im Hoden exprimiert wird. Es lokalisiert im Zytoplasma, am mitotischen Spindelapparat, an den Spindelpolen, an den Kinetochoren, am Mittelkörper und an den Zentrosomen.
• Wesentliche Komponente des mitotischen Spindelapparats, die für eine normale Chromosomensegregation und den Fortschritt in die Anaphase erforderlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:11724960, PMID:12356910, PMID:27462074
• Erforderlich für die Ausrichtung der Chromosomen, den normalen Zeitplan der Schwesterchromatid-Trennung und die Erhaltung der Architektur der Spindelpole. Verwandte Referenzen: PMID:17664331, PMID:27462074
• Fördert in Komplex mit SKAP stabile Mikrotubuli-Kinetochor-Verbindungen und kann die Separase-Aktivität regulieren.
• Kann die Lokalisierung von AURKA am mitotischen Spindelapparat und die Lokalisierung von CCNB1 sowohl am Spindelapparat als auch an den Zentrosomen regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:18361916, PMID:21402792
• Beteiligt an der Zentriolenverdopplung; erforderlich für die zentrosomale Lokalisierung von CDK5RAP2, CEP152, WDR62 und CEP63 sowie zur Förderung der zentrosomalen Lokalisierung von CDK2. Verwandte Referenzen: PMID:26297806
• In nicht-mitotischen Zellen hemmt es mTORC1 durch Rekrutierung von RPTOR zu Stress-Granulen unter Stressbedingungen und verhindert so die durch mTORC1-Hyperaktivierung induzierte Apoptose. Verwandte Referenzen: PMID:23953116
• Kann die GSK3B-vermittelte Phosphorylierung von Substraten wie MAPT/TAU verstärken. Verwandte Referenzen: PMID:18055457

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die Aminosäuren 1-300 von humanem SPAG5 abdeckt, was Antikörper generieren kann, die mehrere Epitope im N-terminalen Bereich anzielen.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Sie die Verwendung mitotischer Zellen (z. B. HeLa oder U2OS, die mit Nocodazol synchronisiert wurden) in Betracht ziehen, um die Lokalisierung am Spindelapparat und an den Kinetochoren zu visualisieren. Optimieren Sie die Fixierungs-/Permeabilisierungsprotokolle, um die Struktur des Spindelapparats zu erhalten.
• Für ELISA können rekombinantes SPAG5-Protein oder Zelllysate aus Hoden oder mitotisch aktiven Zellen als positive Kontrollen dienen. Führen Sie eine Antikörpertitration durch, um die optimale Arbeitsverdünnung zu ermitteln.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität im relevanten Probensystem (z. B. durch siRNA-Knockdown oder CRISPR-Knockout), um den spezifischen Nachweis von SPAG5 zu bestätigen.

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