Anti-Smad5 Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Smad5-Funktion und Lokalisierung

• SMAD5 ist ein Mitglied der SMAD-Familie, auch bekannt als JV5-1, Mothers against decapentaplegic homolog 5 (MAD homolog 5), kodiert durch das SMAD5 (MADH5)-Gen.
• Nach Stimulation durch BMP-Liganden wird SMAD5 durch aktivierte Typ-I-BMP-Rezeptoren (BMPRIs) phosphoryliert und bildet einen Komplex mit SMAD4. Dieser Komplex wandert in den Zellkern und reguliert die Gentranskription durch Bindung an Smad-Bindungselemente (SBEs) (PubMed:9442019, PubMed:33510867). Zugehörige Referenzen: PMID:9442019 PMID:33510867
• SMAD5 spielt eine Rolle bei verschiedenen biologischen Prozessen, einschließlich der embryonalen Entwicklung, Zelldifferenzierung, Angiogenese und Gewebehomöostase (PubMed:12064918, PubMed:16516194). Zugehörige Referenzen: PMID:12064918 PMID:16516194
• In seinem nicht-phosphorylierten Zustand lokalisiert SMAD5 im Zytoplasma und in den Mitochondrien, wo es die mitochondriale Atmung und Glykolyse durch Interaktion mit Hexokinase 1 (HK1) als Reaktion auf Änderungen des zytoplasmatischen pH-Werts fördert (PubMed:28675158). Zugehörige Referenzen: PMID:28675158
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst das Zytoplasma, den Zellkern und die Mitochondrien, was seine duale Rolle bei der Signaltransduktion und dem Energiestoffwechsel widerspiegelt.
• Ubiquitär in verschiedenen Geweben exprimiert.
• Posttranslational durch Phosphorylierung und Acetylierung modifiziert; enthält Zink-bindende und DNA-bindende Domänen, die für seine Funktion als Transkriptionsregulator essenziell sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting ist eine Bande bei etwa 52 kDa zu erwarten; verwenden Sie geeignete Ladekontrollen und validieren Sie mit bekannten positiven und negativen Zelllysaten.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) kann aufgrund der nukleären/zytoplasmatischen Lokalisierung eine Antigen-Demaskierung erforderlich sein; testen Sie an Gewebeschnitten mit bestätigter SMAD5-Expression.
• Das Immunogen umfasst die C-terminale Region (Aminosäuren 186-465) einschließlich der MH2-Domäne, daher kann der Antikörper sowohl phosphorylierte als auch nicht-phosphorylierte Formen erkennen; bestätigen Sie Aktivierungszustände mithilfe phospho-spezifischer Antikörper oder Behandlungen.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf konservierte Epitope hin; bei Anwendung auf andere Spezies prüfen Sie die Sequenzhomologie und führen Sie eine Validierung durch.
• Optimieren Sie für ELISA die Beschichtungsbedingungen und verwenden Sie rekombinantes SMAD5 oder Zelllysate als positive Kontrollen.

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