Anti-Smad4 Kaninchen monoklonaler Antikörper [KO validiert] für WB, IHC-P, IP, ELISA, ChIP, CUT&Tag - Q13485

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von SMAD4

• SMAD Familienmitglied 4 (SMAD4), auch bekannt als DPC4, MADH4 und Co-SMAD, ist ein zentraler Vermittler der TGF-beta- und BMP-Signaltransduktionswege.
• Das gemeinsame SMAD (Co-SMAD) wirkt als Koaktivator und Vermittler der TGF-beta-Signalgebung. Es bildet im Zellkern einen heterotrimeren Komplex mit SMAD2/SMAD3, der für die TGF-beta-vermittelte Transkriptionsregulation erforderlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:25514493
• In der Muskelphysiologie balanciert SMAD4 Atrophie und Hypertrophie: Rekrutiert durch MSTN fördert es über phosphoryliertes SMAD2/4 die Atrophie; bei abnehmendem MSTN wechselt SMAD4 zum BMP-Signalweg und fördert über SMAD1/5/8 die Hypertrophie.
• Wirkt zusammen mit SMAD1 und YY1 bei der BMP-vermittelten herzspezifischen Genexpression und bindet an SMAD-Bindungselemente (SBEs) innerhalb von BMP-Antwortelementen (BMPRE) kardialer aktivierender Regionen.
• Bestandteil des SMAD3/SMAD4/JUN/FOS-Komplexes an der AP1-Promotorstelle, erforderlich für die synergistische TGF-beta-Transkriptionsaktivität.
• Kann als Tumorsuppressor wirken; ursprünglich als Deletionsziel bei Pankreaskarzinom 4 (DPC4) identifiziert, was eine Rolle in der Krebsbiologie nahelegt.
• Die subzelluläre Lokalisation ist überwiegend zytoplasmatisch, translokiert aber nach Rezeptoraktivierung in den Zellkern, was mit seiner Rolle bei der Signaltransduktion übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Für den Western Blot (WB) ist eine Bande von ungefähr 60 kDa zu erwarten; es wird empfohlen, reduzierende Bedingungen zu verwenden und die Validierung mit geeigneten positiven (z. B. HeLa, HEK293) und Knockout (KO) Kontrolllysaten durchzuführen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) werden Antigen-Retrieval und Antikörper-Titration empfohlen; schließen Sie Isotyp-Kontrollen ein und überprüfen Sie die Färbung in relevanten Gewebeschnitten.
• Für die Immunpräzipitation (IP) sind Standardprotokolle mit Protein A/G-Perlen geeignet; bestätigen Sie die Ko-Immunpräzipitation von SMAD-Interaktionspartnern (z. B. SMAD2/3).
• Bei der Durchführung von ChIP oder CUT&Tag befindet sich das Epitop (Aa320-552) in der C-terminalen Region; stellen Sie die Chromatinzugänglichkeit sicher und optimieren Sie die Antikörperkonzentration für jeden Assay.
• ELISA-basierte Detektion kann mit diesem Antikörper als Capture- oder Detektionsantikörper entwickelt werden, aber empirische Checkerboard-Titrationen sind erforderlich, um die optimalen Arbeitskonzentrationen zu bestimmen.

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