Anti-Smad4 Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13485

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Smad4-Funktion und -Lokalisierung

• SMAD4 ist der gemeinsame Vermittler (co-SMAD) der Signaltransduktion der TGF-β-Superfamilie. Es bildet einen heterotrimeren Komplex mit rezeptorregulierten SMADs (z. B. SMAD2/3) im Zellkern, was für die TGF-β-vermittelte transkriptionelle Regulation essentiell ist.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:25514493
• Fungiert als transkriptioneller Coaktivator: SMAD4 erleichtert die DNA-Bindung des SMAD2/SMAD4/FAST-1-Komplexes und stellt eine Aktivierungsdomäne für die SMAD1- oder SMAD2-getriebene Transkription bereit. Es nimmt auch am AP-1-Transkriptionsfaktorkomplex (SMAD3/SMAD4/JUN/FOS) teil, um TGF-β-Antworten zu synergisieren.
• Fungiert als Tumorsuppressor; Verlust oder Inaktivierung von SMAD4 ist ein häufiges Ereignis beim duktalen Pankreasadenokarzinom, kolorektalen Karzinomen und anderen Malignomen, was seine Rolle bei der Wachstumskontrolle unterstreicht.
• In der Muskelphysiologie wirkt SMAD4 als nodaler Schalter: Wenn es durch Myostatin (MSTN) rekrutiert wird, fördert es Atrophie durch SMAD2/4-Signalgebung; wenn es freigesetzt wird, verlagert es sich zu BMP-vermittelter Hypertrophie über SMAD1/5/8 (nach Homologie).
• SMAD4 reguliert die PDPK1-Kinaseaktivität positiv, indem es dessen Dissoziation vom hemmenden 14-3-3-Protein YWHAQ fördert.
• Lokalisiert sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern; die Kerntranslokation wird durch TGF-β- oder BMP-Stimulation induziert, wo es in transkriptionell aktiven Komplexen akkumuliert.
• Enthält N-terminale MH1-Domäne für die DNA-Bindung an SBEs (5'-GTCT/AGAC-3') und C-terminale MH2-Domäne für Rezeptorinteraktion, Oligomerisierung und transkriptionelle Aktivierung. Das Protein unterliegt Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen MH2-Domäne (aa 320–552), die über Mensch, Maus und Ratte hoch konserviert ist, was der berichteten Kreuzreaktivität entspricht. Für neue Spezies wird eine Sequenzausrichtung empfohlen.
• Für Western Blotting (WB) wird eine Bande bei ca. 60 kDa erwartet. Verwenden Sie geeignete Ladungskontrollen und validieren Sie in TGF-ß-behandelten im Vergleich zu unbehandelten Lysaten, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) kann je nach Signalkontext eine kern- oder zytoplasmatische Färbung beobachtet werden. Fügen Sie geeignete Negativkontrollen (z. B. Knockout-Kellinien oder Blockierungspeptid) hinzu, um die Signalspezifität zu verifizieren.
• Für ELISA-Anwendungen optimieren Sie die Beschichtungsantigene und Detektionsbedingungen. Der Antikörper kann mit monoklonalen Antikörpern gegen unterschiedliche Epitope gepaart werden, um Sandwich-ELISA-Systeme zur SMAD4-Quantifizierung zu entwickeln.
• Angesichts der polyklonalen Natur des Antikörpers sollte die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz in kritischen quantitativen Assays überprüft werden. Erwägen Sie die Verwendung rekombinanter Antikörpertechnologie, wenn Reproduzierbarkeit ein Hauptanliegen ist.

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