Anti-SLC12A1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13621

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SLC12A1-Funktion und -Lokalisierung

• SLC12A1 kodiert den nierenspezifischen Na-K-2Cl-Kotransporter (NKCC2), ein Mitglied der Solute-Carrier-Familie 12, der den elektroneutralen Symport von Natrium-, Kalium- und Chloridionen über die apikale Membran der aufsteigenden Henle-Schleife (TAL) vermittelt. Verwandte Referenzen: PMID:21321328
• NKCC2 ist für den transepithelialen NaCl-Rückresorption in der TAL unerlässlich, treibt die Harnkonzentration und Volumenregulation an; es ist das primäre Ziel von Schleifendiuretika wie Bumetanid.
• Der Transporter kann funktionell Ammonium (NH4+) durch Kalium ersetzen und erleichtert die apikale NH4+-Sekretion in der medullären TAL, ein Prozess, der für das renale Ammonium-Gleichgewicht während einer metabolischen Azidose kritisch ist.
• Die Expression von SLC12A1 ist stark nierenspezifisch, wobei die Proteinlokalisation auf die apikale Plasmamembran der Zellen in der kortikalen und medullären aufsteigenden Henle-Schleife beschränkt ist.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung und Phosphorylierung, die die Trafficking und Aktivität des Transporters als Reaktion auf Vasopressin und andere hormonelle Signale regulieren.
• Mutationen in SLC12A1 verursachen das Bartter-Syndrom Typ 1, eine salzverlierende Nierenerkrankung, die durch hypokaliämische Alkalose, Hyperkalziurie und Polyurie gekennzeichnet ist, was die kritische Rolle von NKCC2 im Elektrolytgleichgewicht unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den Resten 50–150 von menschlichem SLC12A1 entspricht. Überprüfen Sie die Epitopkonservierung, wenn Sie nicht-menschliche Proben verwenden, obwohl eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte berichtet wird.
• Für das Western Blotting von NKCC2 (vorhergesagtes MG ~121 kDa) sollten Sie die Verwendung eines Polyacrylamidgels mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6–8 %) und verlängerte Transferzeiten in Betracht ziehen, um einen effizienten Transfer dieses großen, glykosylierten Membranproteins zu gewährleisten.
• Fügen Sie Phosphataseinhibitoren den Lysepuffern hinzu und erwägen Sie eine Phosphatasebehandlung, um phosphorylierungsabhängige Bandverschiebungen aufzulösen, da NKCC2 durch Phosphorylierung als Reaktion auf Hormone reguliert wird.
• Für ELISA-Anwendungen könnte ein kompetitiver Assay-Design mit dem Immunisierungspeptid oder ein Capture-Format unter Verwendung eines rekombinanten Fragment der extrazellulären Domäne geeignet sein; optimieren Sie den Beschichtungspuffer und die Blockierungsbedingungen, um unspezifische Bindungen zu minimieren.

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