Anti-SIGLEC3/CD33-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P20138

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von SIGLEC3/CD33

• CD33 (Siglec-3, p67, gp67) ist ein Typ-I-Transmembranprotein mit nur einer Transmembrandomäne und ein Mitglied der Familie der sialinsäurebindenden immunglobulinähnlichen Lektine (Siglecs), das durch eine N-terminale Ig-ähnliche Domäne des V-Sets und einen zytoplasmatischen Schwanz mit zwei immunrezeptor-tyrosinbasierten inhibitorischen Motiven (ITIMs) charakterisiert ist.
• Es fungiert als inhibitorischer Rezeptor. Nach Bindung von Sialinsäure-Liganden oder C1q werden die ITIMs durch Src-ähnliche Kinasen wie LCK phosphoryliert, was zur Rekrutierung der Tyrosinphosphatasen PTPN6/SHP-1 und PTPN11/SHP-2 führt, die die Immunsignalübertragung herunterregulieren (PubMed:10887109, 10556798, 10206955). Zugehörige Referenzen: PMID:10887109, PMID:10556798, PMID:10206955
• Bindet bevorzugt an α-2,3- und α-2,6-verknüpfte Sialinsäuren, mit höherer Avidität für α-2,6-verknüpfte Glykane (PubMed:7718872). Zugehörige Referenz: PMID:7718872
• Der repressive Effekt von CD33 auf die Monozytenaktivierung beinhaltet die Signalübertragung über die Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) (PubMed:15597323). Zugehörige Referenz: PMID:15597323
• Auf subzellulärer Ebene ist CD33 in der Plasmamembran und in Peroxisomen lokalisiert.
• Wird spezifisch auf Zellen der monozytären/myeloiden Linie exprimiert, einschließlich Monozyten, Makrophagen und Granulozyten; im zentralen Nervensystem findet es sich überwiegend auf Mikrogliazellen.
• Zu den hervorgehobenen Funktionen gehören Zelladhäsion, Immunregulation und alternatives Spleißen; dokumentiert sind außerdem Glykoprotein- und Phosphoprotein-Modifikationen.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 49–259 des humanen CD33 (extrazelluläre Domäne) und umfasst die sialinsäurebindende Ig-Domäne des V-Sets. Dieses Design zielt auf die native Konformation ab und eignet sich daher zum Nachweis von oberflächenexprimiertem CD33 in durchflusszytometrieähnlichen Anwendungen (IF/ICC) und in der Immunhistochemie (IHC-P).
• Beim Western Blot (WB) beträgt das erwartete Proteingewicht etwa 40 kDa; aufgrund der Glykosylierung kann die beobachtete Bande jedoch bei einem höheren Molekulargewicht erscheinen. Es empfiehlt sich, ein reduzierendes Gel zu verwenden und mit geeigneten Positivkontrollen zu validieren, beispielsweise myeloiden Zelllinien wie HL-60 oder THP-1.
• Bei der Verwendung dieses polyklonalen Antikörpers in der Immunpräzipitation oder im ELISA sollte berücksichtigt werden, dass die polyklonale Natur die Sensitivität erhöhen kann, aber möglicherweise auch den Hintergrund verstärkt. Eine Optimierung der Blockierungs- und Waschbedingungen wird empfohlen.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf konservierte Epitope hin. Für spezifische experimentelle Anwendungen sollte jedoch ein Sequenzvergleich durchgeführt werden; eine Validierung in der jeweils relevanten Spezies ist unerlässlich.
• Für IHC-P sollten Methoden zur Antigenfreilegung, beispielsweise Citratpuffer mit pH 6,0, sowie die Bedingungen der Gewebefixierung optimiert werden, da die Zugänglichkeit der Epitope variieren kann.
• Dieser Antikörper eignet sich als Capture- oder Detektionskomponente in einem Sandwich-ELISA, wenn er mit einem passenden Antikörper kombiniert wird. Anwender sollten seine Leistungsfähigkeit in den jeweils verwendeten Puffersystemen überprüfen.

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