Anti-SARS-CoV Spike RBD Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB und ELISA - P59594

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Spike-Glykoproteins

• Das Spike-Glykoprotein (S) von SARS-CoV, auch bekannt als E2 oder Peplomer-Protein, ist ein virales Fusionsprotein der Klasse I, das den Eintritt des Virus in Wirtszellen vermittelt.
• Es bindet das Virion an die Wirtszellmembran, indem es mit Wirtsrezeptoren, hauptsächlich Angiotensin-converting Enzym 2 (ACE2) und CLEC4M/DC-SIGNR, interagiert und die Infektion einleitet.
• Nach der Rezeptorbindung und Internalisierung des Virus in Endosomen unterzieht sich das S-Protein konformationellen Änderungen. Die proteolytische Spaltung durch die Wirtscathepsin L (CTSL) deckt das Fusionspeptid auf und ermöglicht die Fusion der viralen und endosomalen Membranen.
• Das S-Protein fungiert auch als virales Immunoevasin, indem es das Wirts-Tetherin (BST2) durch lysosomalen Abbau herunterreguliert und so die angeborene Immunantwort des Wirts entgegenwirkt.
• Subzellulär befindet sich das Spike-Protein an der Virionmembran, der Wirtszellmembran und der Membran des Intermediärkompartiments zwischen endoplasmatischem Retikulum und Golgi-Apparat der Wirtszelle.
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören ein Signalpeptid, eine große Ektodomäne, die die Rezeptorbindungsdomäne (RBD) enthält, Heptad-Wiederholungsbereiche, die eine Coiled-Coil-Trimer-von-Haarnadeln-Struktur bilden, eine Transmembrandomäne und ein cytoplasmatischer Schwanz. Es ist N-verknüpft glycosyliert, enthält Disulfidbrücken und ist palmitoyliert.
• Das Spike-Glykoprotein ist für den Viruseintritt, die Virulenz und die Immunoevasion essentiell, was es zu einem Hauptziel für Diagnostika und die Impfstoffentwicklung macht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 350-450 innerhalb der RBD des Spike-Proteins, daher kann dieser Antikörper das全长-Spike-Protein (~139 kDa) oder die gespaltene S1-Untereinheit im WB unter reduzierenden oder nicht-reduzierenden Bedingungen nachweisen.
• Für den WB sollten Sie die Verwendung von SDS-PAGE mit geeigneten Kontrollen wie rekombinantem Spike-Protein oder Lysaten aus SARS-CoV-infizierten Zellen in Betracht ziehen. Validieren Sie den Antikörper im relevanten Probensystem, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA können Capture- oder Detektionsassays unter Verwendung von rekombinanter RBD oder Spike-Protein entworfen werden. Optimale Beschichtungspuffer und Antikörperverdünnungen sollten experimentell ermittelt werden.
• Aufgrund der Spezifität für die RBD kann dieser Antikörper nützlich in Neutralisierungs- oder Wettbewerbsassays sein, aber solche Anwendungen erfordern eine individuelle Validierung.

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