Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 ECD Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für WB, DB, IF/ICC, IP und ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des Spike-Glykoproteins (S)

• Das Spike(S)-Glykoprotein ist ein virales Fusionsprotein der Klasse I, das in die Untereinheiten S1 und S2 gespalten wird. S1 enthält die rezeptorbindende Domäne, während S2 das Protein verankert und die Membranfusion durchführt.
• S1 bindet an den Wirtsrezeptor ACE2, um die Infektion zu initiieren. Alternative Eintrittsrezeptoren sind Neuropilin-1 (NRP1), Neuropilin-2 (NRP2), Integrine und der Asialoglykoprotein-Rezeptor 1 (ASGR1), die zum Tropismus von SARS-CoV-2 in Zellen mit geringer ACE2-Expression beitragen können.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086, PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Die proteolytische Spaltung von S2 an der S2'-Stelle durch das wirtseigene TMPRSS2 (Zelloberfläche) oder Cathepsin L (Endosom) löst irreversible Konformationsänderungen aus, die zur Fusion der viralen Hülle mit der Wirtsmembran führen und das virale Genom im Zytoplasma freisetzen.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• Die S2-Untereinheit enthält Heptad-Wiederholungsregionen (HR1 und HR2), die zu einem Sechs-Helix-Bündel falten und die virale und zelluläre Membran für die Fusion in enger Nähe bringen.
• Subzellulär lokalisiert das Spike-Protein zur Virionmembran, zum intermediären Kompartiment des Wirts-ER-Golgi (ERGIC) und zur Plasmamembran der Wirtszelle.
• Spike ist stark N-glykosyliert und palmitoyliert, enthält Disulfidbindungen und fungiert als Superantigen; es unterdrückt außerdem die angeborene Immunantwort des Wirts und wirkt gegen Tetherin.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen erstreckt sich über die extrazelluläre Domäne von S2 (Aa 686-1214) und deckt konservierte Funktionselemente einschließlich des Fusionspeptids und der Heptad-Wiederholungen ab. Dieses Design ermöglicht die Erkennung von S2 auch nach dem Verlust von S1.
• Bei Western Blot wandert das vollständige Spike-Protein unter reduzierenden Bedingungen bei ~141 kDa; bei gespaltenem S2 kann eine Bande bei ~70-80 kDa beobachtet werden. Validieren Sie Ihre Lyse- und Probenvorbereitungsbedingungen.
• Fügen Sie bei Immunfluoreszenz/ICC einen Permeabilisierungsschritt hinzu, um Spike zusätzlich zur Plasmamembran auch in intrazellulären Kompartimenten (ERGIC) nachzuweisen.
• Bei Capture-ELISA erwägen Sie die Kombination dieses pAb mit einem monoklonalen Antikörper gegen die S1-Untereinheit, um spezifisch vollständiges Spike zu messen, oder verwenden Sie ihn als Nachweisreagenz zur Quantifizierung von S2-Spiegeln.
• Der Dot Blot (DB) kann für das schnelle Screening der Antigenexpression in Zelllysaten oder rekombinanten Proteinen verwendet werden; optimieren Sie Antigenkonzentration und Pufferbedingungen.
• Immunpräzipitation (IP) kann Spike-Komplexe erfassen; fügen Sie geeignete Negativkontrollen hinzu, um unspezifische Bindung zu bewerten.

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