Polyklonaler Anti-SARS-CoV-2-Spike-ECD-Antikörper für WB, ELISA – P0DTC2

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des SARS-CoV-2-Spike-Glykoproteins

• Das Spike-Glykoprotein (S, E2, Peplomerprotein) ist ein virales Fusionsprotein der Klasse I, das den Eintritt von SARS-CoV-2 in Wirtszellen durch Bindung an den ACE2-Rezeptor vermittelt (PubMed:32142651, PubMed:32155444, PubMed:33607086). Zugehörige Referenzen: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Nach der Rezeptorbindung löst die Spaltung an der S2/S2'-Stelle durch die Wirtsproteasen TMPRSS2 oder Cathepsin L (CSTL) die Membranfusion aus, entweder an der Zelloberfläche oder innerhalb von Endosomen (PubMed:32142651, PubMed:32703818, PubMed:34159616). Zugehörige Referenzen: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616
• Das Spike-Protein kann auch alternative Rezeptoren wie NRP1/NRP2 und Integrine nutzen, was zum Tropismus für olfaktorische Epithelzellen und zu ACE2-unabhängigen Eintrittswegen beiträgt (PubMed:33082293, PubMed:33082294, PubMed:35150743). Zugehörige Referenzen: PMID:33082293 PMID:33082294 PMID:35150743
• Die Spike-Ektodomäne (ECD) umfasst die S1-Rezeptorbindungseinheit und die S2-Fusionseinheit, wobei flexible Gelenke im Stiel eine dynamische Ausrichtung ermöglichen (PubMed:32817270). Zugehörige Referenzen: PMID:32817270
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich das Spike-Protein auf der Virionmembran, der Membran des endoplasmatischen Retikulums-Golgi-Übergangskompartiments der Wirtszelle sowie auf der Wirtszellmembran.
• Das Protein ist stark glykosyliert und palmitoyliert und weist für die virale Fusionsmaschinerie charakteristische Disulfidbrücken und coiled-coil-Regionen auf.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen war ein rekombinantes Fusionsprotein, das die gesamte extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 11–1208) abdeckt, wodurch sich der Antikörper für den Nachweis von Spike-ECD-Formen in voller Länge und in löslicher Form eignet.
• Für den Western Blot unter reduzierenden Bedingungen sollte ein denaturierender Probenpuffer mit β-Mercaptoethanol oder DTT verwendet werden, da das Spike-Protein mehrere Disulfidbrücken enthält.
• Dieser Antikörper ist für ELISA validiert und potenziell für Spike-Antigen-Capture- oder Bindungsassays geeignet; eine Optimierung der Beschichtungs- und Blockierungsbedingungen wird empfohlen.

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