Anti-SARS-CoV-2 NSP15 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P0DTD1

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NSP15-Funktion und -Lokalisierung

• NSP15 wird vom rep-Gen von SARS-CoV-2 als Teil des großen ORF1ab-Polyproteins (auch bekannt als Replikase-Polyprotein 1ab) kodiert, das proteolytisch in mehrere nicht-strukturelle Proteine (NSPs) prozessiert wird, die für den viralen Lebenszyklus essentiell sind.
• NSP15 fungiert als Uridylat-spezifische Endoribonuklease (EndoU), die eine zentrale Rolle bei der viralen Transkription und Replikation spielt, indem sie die während der Replikation der poly(A)-Region viraler genomischer und subgenomischer RNAs erzeugten 5'-Polyuridine abbaut. Diese Aktivität verhindert die Anreicherung von Poly(U)-RNA, die sonst mit poly(A)-Schwänzen hybridisieren und Wirts-dsRNA-Sensoren aktivieren würde, wodurch die angeborene Immunerkennung umgangen wird. Verwandte Referenzen: PMID:33504779 PMID:33564093
• Die Endonuklease-Aktivität von NSP15 verhindert die gleichzeitige Aktivierung von Wirtszell-dsRNA-Sensoren, einschließlich MDA5/IFIH1, OAS und PKR, und erleichtert so die Immunflucht.
• Es wurde gezeigt, dass NSP15 genomische dsRNA in Verbindung mit dem Replikations-Transkriptions-Komplex (RTC) bindet und möglicherweise auch zur diskontinuierlichen Transkription durch nsp12 beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:34562452 PMID:35706445
• NSP15 katalysiert eine zweistufige Reaktion: 2'-O-Transesterifizierung, die ein 2',3'-zyklisches Phosphat erzeugt, gefolgt von Hydrolyse zu einem 3'-Phosphat. Verwandte Referenzen: PMID:33504779 PMID:33564093
• Als Bestandteil des Replikase-Polyproteins lokalisiert NSP15 zu Wirts-cytoplasmatischen Replikationsorganellen, einschließlich doppelmembrangebundener Vesikel, die aus dem endoplasmatischen Retikulum stammen, wo die virale RNA-Synthese stattfindet (nach Ähnlichkeit, basierend auf Polyprotein-Lokalisierungs-Schlüsselwörtern).
• Das NSP15-Protein ist unter Coronaviren konserviert und gilt aufgrund seiner Rollen bei der viralen Replikation und Immunflucht als attraktives antivirales Ziel.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einem synthetischen Peptid innerhalb der NSP15-Region (Aminosäuren 6600-6700 von YP_009724389.1); daher wird erwartet, dass der Antikörper NSP15 erkennt, aber möglicherweise auch das unverarbeitete ORF1ab-Polyprotein in infizierten Zelllysaten detektiert. Für Western Blot (WB) sollten Lysate von SARS-CoV-2-infizierten Zellen verwendet und das Bandenmuster mit geeigneten Kontrollen validiert werden.
• Für ELISA sollte rekombinantes NSP15-Protein oder das immunisierende Peptid immobilisiert und Beschichtungsbedingungen sowie Antikörperverdünnungen optimiert werden. Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, sollte die Chargen-zu-Charge-Konsistenz überprüft werden.
• Kreuzreaktivität mit anderen Coronaviren oder Wirtsproteinen wurde nicht getestet; validieren Sie dies bei Bedarf in Ihrem spezifischen experimentellen System.

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