Anti-SARS-CoV-2 3CLpro-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von SARS-CoV-2 3CLpro

• Das Spike-Glykoprotein (S) ist ein virales Fusionsprotein der Klasse I, das den Eintritt von SARS-CoV-2 in Wirtszellen vermittelt. Es wird als Vorläufer synthetisiert und proteolytisch in die S1- und S2-Untereinheiten gespalten.
• Die S1-Untereinheit enthält die Rezeptorbindungsdomäne (RBD), die an den menschlichen ACE2-Rezeptor (Angiotensin-konvertierendes Enzym 2) bindet, um die Anheftung des Virus an die Wirtszellen zu erleichtern. Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Alternative Eintrittspfade nutzen Neuropilin-1 (NRP1), NRP2, Integrine oder ASGR1, was zur Gewirtstropismus beitragen kann, insbesondere in olfaktorischen Epithelzellen, die niedrige ACE2-Spiegel aufweisen. Verwandte Referenzen: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• Die S2-Untereinheit vermittelt die Membranfusion durch eine scharnierabhängige konformationelle Umordnung, wobei sie vom Prä-Fusions- in den Post-Fusions-Haarnadelzustand übergeht. Dies erfordert eine Spaltung an der S2'-Stelle durch Wirtsproteasen wie TMPRSS2 oder Cathepsin L. Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Der Stängelbereich von S enthält drei Scharniere, die dem rezeptorbindenden Kopf eine bemerkenswerte orientierungsfreiheit verleihen, was der Immun evasion dienen könnte. Verwandte Referenzen: PMID:32817270
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst die Virionmembran, die Membran des endoplasmatischen Retikulums-Golgi-Zwischenkompartments (ERGIC) des Wirts und die Wirtszellmembran, was konsistent mit seinen Rollen bei der Assembly, dem Austritt und dem Eintritt ist.
• Das Protein ist stark glykosyliert und enthält konservierte Disulfidbindungen, Coiled-Coil-Bereiche und Transmembrandomänen; es zeigt auch superantigene Eigenschaften und trägt zur Immun evasion bei.
• Sein Molekulargewicht beträgt ca. 141 kDa, und es ist ein Hauptziel für neutralisierende Antikörper, diagnostische Tests und die Impfstoffentwicklung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da das Immunogen ein rekombinantes 3CLpro-Fragment (Aminosäuren 1-306) ist, verwenden Sie geeignete Positivkontrollen wie Lysate aus SARS-CoV-2-infizierten Zellen oder gereinigtes rekombinantes 3CLpro, um die Spezifität zu validieren.
• Für Western Blots sollten Sie die Blockierungs- und Antikörperverdünnungsbedingungen optimieren; eine Bande bei ca. 34 kDa (vollständiges 3CLpro) wird erwartet, aber der Lieferant berichtet von einer 141 kDa-Bande (wahrscheinlich entsprechend dem Spike-Protein). Überprüfen Sie die detektierte Bande mit geeigneten Molekulargewichtsmarkern und Kontrollantigenen.
• Fügen Sie bei Immunfluoreszenz/ICC-Experimenten Permeabilisierungsschritte für die Detektion intrazellulärer Proteasen hinzu und führen Sie eine Gegenfärbung mit Organellmarkern durch, um die subzelluläre Lokalisierung zu beurteilen.
• Für ELISA ermöglicht die polyklonale Natur die Verwendung sowohl als Fang- als auch als Nachweisantikörper in Sandwich-Formaten. Kombinieren Sie sie mit monoklonalen Antikörpern gegen unterschiedliche Epitope, um die Spezifität und das Signal-Rausch-Verhältnis zu verbessern.
• Berücksichtigen Sie eine potenzielle Kreuzreaktivität mit 3CLpro anderer Coronaviren; Sequenzalignment und kompetitive Hemmtests können zur Bestätigung der Spezifität beitragen.
• Validieren Sie den Antikörper immer in Ihrem spezifischen experimentellen System, da die Leistung je nach Probentyp und Fixierungsmethode variieren kann.

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