Anti-SARS-CoV-2 3CLpro Monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des Spike-Glykoproteins

• Das Spike-Glykoprotein (S) ist ein trimeres Fusionsprotein der Klasse I, das den viralen Eintritt durch Bindung an den Wirtsrezeptor Angiotensin-Converting-Enzym 2 (ACE2) vermittelt (PubMed:32142651, PubMed:32155444, PubMed:33607086). Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Nach der Rezeptorbindung wird das S-Protein an der S2'-Stelle durch Wirtsproteasen wie TMPRSS2 oder Cathepsin L proteolytisch gespalten, was irreversible Konformationsänderungen auslöst, die die Membranfusion antreiben (PubMed:32142651, PubMed:32703818, PubMed:34159616, PubMed:34561887). Verwandte Referenzen: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Das Spike-Protein kann auch alternative Rezeptoren für den Eintritt nutzen, darunter Neuropilin-1 (NRP1) und Neuropilin-2 (NRP2), was zur Infektion von olfaktorischen Epithelzellen mit niedriger ACE2-Expression beitragen kann (PubMed:33082294, PubMed:33082293). Verwandte Referenzen: PMID:33082294 PMID:33082293
• Zusätzlich kann der Asialoglykoproteinrezeptor 1 (ASGR1) als alternativer Rezeptor auf ACE2-unabhängige Weise dienen (PubMed:34837059). Verwandte Referenzen: PMID:34837059
• Das S-Protein lokalisiert an der Virionmembran und wird während der Infektion auch im endoplasmatischen Retikulum-Golgi-Zwischenkompartiment (ERGIC) des Wirts und auf der Wirtszellmembran gefunden.
• Es enthält zwei Heptad-Wiederholungsregionen (HR1 und HR2), die eine Sechs-Helix-Bündel-Struktur bilden, die für die Membranfusion kritisch ist, und das Protein ist stark glykosyliert mit mehreren Disulfidbindungen und Palmitoylierungsstellen.
• Das Spike-Protein wirkt auch als Superantigen und hemmt angeborene Immunantworten des Wirts, einschließlich der Tetherin-Antagonismus, was zur Immunevasion beiträgt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot (WB) kann eine Bande bei ~34 kDa (3CLpro-Monomer) beobachtet werden; verwenden Sie während der Probenvorbereitung Proteaseinhibitoren, um einen Abbau der viralen Protease zu verhindern.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) sorgen Sie für eine korrekte Fixierung und Permeabilisierung zum Nachweis von zytoplasmatischem 3CLpro in SARS-CoV-2-infizierten Zellen; validieren Sie in geeigneten Positivkontroll-Zelllinien.
• Bei ELISA-Anwendungen kann eine Titrierung des Antikörpers und des rekombinanten 3CLpro-Antigens erforderlich sein; erwägen Sie ein Sandwich-ELISA-Format für hohe Empfindlichkeit.
• Aufgrund der Sequenzkonservierung kann eine Kreuzreaktivität mit 3CLpro aus anderen Coronaviren nicht ausgeschlossen werden; überprüfen Sie die Spezifität im entsprechenden Probensystem.

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