Anti-RTF1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q92541

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: RTF1-Funktion und -Lokalisierung

• RTF1 (RNA-Polymerase-assoziiertes Protein RTF1-Homolog), auch bekannt als GTL7 und KIAA0252, ist eine Kernkomponente des PAF1-Komplexes (PAF1C), der die Transkriptionselongation durch RNA-Polymerase II und die Chromatinmodifikation reguliert.
• PAF1C assoziiert mit der RNA-Polymerase II durch Interaktion mit der C-terminalen Domäne (CTD) von POLR2A sowohl in nicht-phosphorylierter als auch phosphorylierter Form (Ser-2 und Ser-5) und wirkt unabhängig und synergistisch mit Elongationsfaktoren wie TCEA1.
• Der Komplex ist für die Transkription von Entwicklungsgenen, einschließlich Hox- und Wnt-Zielgenen, unerlässlich und spielt eine Rolle bei der Hämatopoese und der Leukämogenese durch Assoziation mit KMT2A/MLL1-umarrangierten Onkoproteinen.
• RTF1 ist im Nukleoplasma innerhalb des Zellkerns lokalisiert, was seiner Rolle bei der Transkriptionsregulation entspricht.
• PAF1C ist an Histonomodifikationen beteiligt: Es rekrutiert die E3-Ubiquitinligase RNF20/40 und die E2-Enzyme UBE2A/B, um die Mono-Ubiquitinierung von Histon H2B bei Lys-120 (H2BK120ub1) zu katalysieren, und ist für die Trimethylierung von Histon H3 bei Lys-4 (H3K4me3) an Genen für die Stammzellpluripotenz erforderlich.
• Das Protein enthält eine Coiled-Coil-Domäne, bindet einsträngige DNA und wird durch Phosphorylierung reguliert.
• Während einer Influenza-A-H3N2-Infektion interagiert PAF1C mit dem viralen NS1-Protein, um die Transkription von Wirtsgenen zu modulieren.
• RTF1 ist für die maximale Induktion von Hitzeschockgenen erforderlich.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen war ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 300-400 von menschlichem RTF1 abdeckt; erwägen Sie die Verwendung dieses Bereichs, um die Antikörperspezifität durch Peptid-Blockierungsexperimente zu verifizieren.
• Für den Western Blot hat menschliches RTF1 ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~80 kDa; validieren Sie mit geeigneten positiven und negativen Kontrollen (z. B. menschliche und murine Zelllysate), da eine Kreuzreaktivität mit der Maus berichtet wird.
• Der Antikörper ist für ELISA geeignet; optimieren Sie die Beschichtungs- und Detektionsbedingungen basierend auf der nukleoplasmatischen Lokalisierung des Ziels.
• RTF1 ist ein Phosphoprotein; beachten Sie, dass posttranslationale Modifikationen die Detektion bei bestimmten Probenvorbereitungen beeinträchtigen könnten; erwägen Sie die Verwendung von Phosphatase-Inhibitoren in Lysepuffern, falls erforderlich.
• Für ein angereichertes Signal können Kernextrakte aufgrund der nukleären Lokalisierung von RTF1 von Vorteil sein.

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