Kaninchen-polyklonaler Anti-RRM1-Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - P23921

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RRM1

• RRM1 ist die große Untereinheit der Ribonukleotidreduktase (RNR), eines heterodimeren Enzyms, das für die de-novo-Synthese von Desoxyribonukleosiddiphosphaten (dNDPs) aus Ribonukleosiddiphosphaten (rNDPs) entscheidend ist und die monomeren Vorläufer für die DNA-Replikation und -Reparatur bereitstellt.
• Es fungiert als allosterisches Enzym. Seine Aktivität wird durch ATP-Bindung reguliert, während die Spezifität für das Nukleotidsubstrat durch die Bindung von dATP, dGTP oder dTTP an die Spezifitätsstelle gesteuert wird.
• RRM1 muss mit einer kleinen Untereinheit (RRM2 oder p53R2) einen Komplex bilden, um das aktive Holoenzym zu bilden; die große Untereinheit trägt die katalytischen und allosterischen Regulationsstellen.
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich RRM1 hauptsächlich im Zytoplasma, wo der Nukleotidstoffwechsel und die Synthese von DNA-Vorläufern stattfinden.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung und Phosphorylierung, die die Enzymaktivität, Stabilität oder Protein-Protein-Wechselwirkungen modulieren können.
• Mutationen in RRM1 werden mit autosomal-rezessiven Syndromen der mitochondrialen DNA-Depletion in Verbindung gebracht, einschließlich progressiver externer Ophthalmoplegie. Dies unterstreicht seine essenzielle Rolle bei der Aufrechterhaltung ausgewogener dNTP-Pools für die Synthese mitochondrialer DNA.
• Das Protein gehört zur Klasse-I-Familie der Ribonukleotidreduktasen und weist strukturelle Homologie zu den großen RNR-Untereinheiten von Bakterien und Eukaryoten auf.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Auf Grundlage des Immunogens (C-terminaler Bereich, Aminosäuren 593-792) ist zu erwarten, dass der Antikörper das vollständige RRM1-Protein (~90 kDa) erkennt und möglicherweise Isoformen oder Spaltprodukte nachweist; geeignete Molekulargewichtsmarker und Kontrollen sollten einbezogen werden.
• Für den Western Blot sollten optimierte Beladungs- und Transferbedingungen für hochmolekulare Zielproteine verwendet werden; eine verstärkte Chemilumineszenz und verlängerte Belichtungszeiten können in Betracht gezogen werden.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC ist eine zytoplasmatische Lokalisation zu erwarten. Fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen angemessen, beispielsweise mit 4 % PFA und anschließender Permeabilisierung mit Triton X-100, um den Zugang des Antikörpers sicherzustellen.
• Bei der Immunpräzipitation sollte die Kompatibilität mit Ihrem Lysepuffer und Ihren Elutionsbedingungen bestätigt werden. Führen Sie ein Lysat als Positivkontrolle, beispielsweise von HeLa- oder HEK293-Zellen, mit, um die Effizienz der Bindung zu überprüfen.
• Der Antikörper zeigt Reaktivität mit Mensch und Maus. Bei der Untersuchung anderer Arten sollte die Kreuzreaktivität aufgrund einer möglichen Sequenzdivergenz im Ziel-Epitop validiert werden.

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