Anti-RPE65-polyklonaler Antikörper für WB und ELISA – Q16518

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RPE65

• RPE65, auch bekannt als Retinoid-Isomerohydrolase, p63, BCO3, LCA2, RP20, rd12, mRPE65 und sRPE65, ist ein Schlüsselenzym im Sehzyklus.
• Es katalysiert die isomerohydrolasevermittelte Spaltung von All-trans-Retinylestern zu 11-cis-Retinol, einem entscheidenden Schritt bei der Regeneration des visuellen Chromophors 11-cis-Retinal. Zugehörige Referenzen: PMID:16116091
• RPE65 ist für die Produktion von 11-cis-Retinal in Stäbchen- und Zapfen-Photorezeptoren unerlässlich, wie in Funktionsstudien gezeigt wurde. Zugehörige Referenzen: PMID:17848510
• Das Enzym zeigt außerdem Isomeraseaktivität gegenüber Lutein und wandelt es in Meso-Zeaxanthin um, ein augenspezifisches Carotinoid. Zugehörige Referenzen: PMID:28874556
• Auf subzellulärer Ebene ist RPE65 im Zytoplasma, in der Zellmembran und in mikrosomalen Membranen lokalisiert; seine Membranassoziation wird durch Palmitoylierung reguliert.
• Seine Expression ist auf Proteinebene hochspezifisch für das retinale Pigmentepithel (RPE).
• Mutationen im RPE65-Gen stehen mit erblichen Netzhautdystrophien in Verbindung, darunter die kongenitale Leber-Amaurose Typ 2 (LCA2) und die Retinitis pigmentosa Typ 20 (RP20).
• Posttranslationale Modifikationen wie Acetylierung, Palmitoylierung und Phosphorylierung spielen eine wichtige Rolle bei der Regulierung seiner Aktivität und des intrazellulären Transports.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 340–440 des humanen RPE65, eine zwischen Mensch und Maus gut konservierte Region, was wahrscheinlich die beobachtete Kreuzreaktivität erklärt. Bei Bedarf sollten Anwender die Reaktivität mit anderen Spezies durch Sequenzalignment überprüfen.
• Für den Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 61 kDa. Verwenden Sie geeignete Positivkontrollen, beispielsweise Lysate des retinalen Pigmentepithels, und optimieren Sie die Blockierungsbedingungen, um unspezifische Banden zu minimieren.
• Für ELISA kann dieser polyklonale Antikörper als Fang- oder Detektionsreagenz eingesetzt werden. Es wird empfohlen, eine Titration im jeweiligen Assaypuffer durchzuführen, um die optimale Arbeitskonzentration zu bestimmen.
• Da RPE65 ein membranassoziiertes Protein ist, sollten für nachfolgende Anwendungen Lysepuffer mit milden Detergenzien, beispielsweise 0,1 % Triton X-100 oder NP-40, verwendet werden, um die Effizienz der Proteinextraktion zu verbessern.

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