Anti-RPA70/RPA1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA, ChIP - P27694

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von RPA70/RPA1

• Die RPA70-Untereinheit, kodiert von RPA1 (auch bekannt als REPA1), ist die 70 kDa schwere DNA-bindende Komponente des heterotrimeren Replikationsprotein A (RPA)-Komplexes, der außerdem die Untereinheiten RPA2 und RPA3 umfasst. Zusammen binden und stabilisieren sie einzelsträngige DNA (ssDNA)-Intermediate.
• RPA ist unentbehrlich für die chromosomale DNA-Replikation und organisiert die zelluläre Antwort auf DNA-Schäden. Es aktiviert DNA-Schadenscheckpoints und erleichtert die Wahl des Reparaturwegs. Verwandte Referenzen: PMID:9430682
• Durch die Rekrutierung von ATRIP aktiviert RPA die ATR-Kinase, einen Hauptregulator der DNA-Schadensantwort, und verbindet so die ssDNA-Erkennung mit der globalen Checkpoint-Signalübertragung. Verwandte Referenzen: PMID:24332808
• RPA wird für die Rekrutierung der homologen Rekombinationsfaktoren RAD51 und RAD52 zum Chromatin an Stellen von DNA-Doppelstrangbrüchen benötigt. Verwandte Referenzen: PMID:17765923
• Bei der Nukleotid-Exzisionsreparatur (NER) rekrutiert RPA direkt XPA und XPG zu Schadensstellen und ist essenziell für den doppelten Inzisions-/Exzisionsschritt dieses Reparaturwegs. Verwandte Referenzen: PMID:7697716
• RPA trägt zur Telomererhaltung bei und bewahrt die genomische Integrität; Mutationen in RPA1 sind mit Telomerbiologiestörungen verbunden. Verwandte Referenzen: PMID:17959650 | PMID:34767620
• Ein alternativer RPA-Komplex, aRPA, entsteht, wenn RPA4 RPA2 ersetzt. Dieser Komplex behält die ssDNA-Bindungsfähigkeit bei, wirkt aber hauptsächlich bei der DNA-Reparatur statt bei der chromosomalen DNA-Replikation. Verwandte Referenzen: PMID:19996105
• RPA stimuliert die 5'-3'-Helikaseaktivität von BRIP1/FANCJ und verbindet es so mit der Reparatur von Interstrangvernetzungen und der Erhaltung der Replikationsgabelstabilität. Verwandte Referenzen: PMID:17596542
• RPA70 ist überwiegend nukleär und lokalisiert zu PML-Körperchen. Es unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, darunter Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Proteininteraktionen regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid im N-terminalen Bereich (Aminosäuren 1–100). Für das Western Blotting beträgt das erwartete Molekulargewicht etwa 68 kDa; Ganzzelllysate aus kultivierten menschlichen oder Rattenzellen sind geeignete Ausgangsmaterialien.
• Beachten Sie bei ChIP-Assays, dass das Epitop in einem unstrukturierten Bereich liegt; erwägen Sie die Induzierung von DNA-Schäden (z. B. durch UV- oder Hydroxyharnstoffbehandlung), um RPA-gebundene Loci anzureichern und die Leistung zu überprüfen.
• Bei IP- und ELISA-Anwendungen testen Sie den Antikörper unter Ihren spezifischen Pufferbedingungen vorab, da er ein lineares Epitop erkennt. Fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität in Ihrem System mit siRNA-vermitteltem Knockdown oder CRISPR/Cas9-Knockout-Proben.

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