Anti-RPA2 Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P15927

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von RPA2

• RPA2, auch bekannt als 32 kDa-Untereinheit des Replikationsproteins A (RP-A p32) oder RP-A p34, ist ein Bestandteil des heterotrimeren Replikationsprotein-A (RPA)-Komplexes, der aus RPA1 (70 kDa), RPA2 (32 kDa) und RPA3 (14 kDa) besteht.
• Der RPA-Komplex bindet und stabilisiert einzelsträngige DNA (ssDNA)-Intermediate, die während der DNA-Replikation, -Reparatur und -Rekombination entstehen, verhindert deren Rückannealing und erleichtert die Rekrutierung wichtiger metabolischer Proteine.
• Bei der DNA-Replikation ist RPA essenziell für die Initiations- und Elongationsphasen, gewährleistet die prozessive DNA-Synthese und schützt die Replikationsgabel.
• Nach DNA-Schäden fungiert der RPA-Komplex als Sensor und Plattform: Er rekrutiert die ATR-Kinase über ATRIP, aktiviert den DNA-Schadenscheckpunkt und rekrutiert Reparaturfaktoren wie RAD51 und RAD52 für die homologe Rekombination sowie XPA und XPG für die Nukleotid-Exzisionsreparatur.
• RPA2 spielt auch eine Rolle bei der Basen-Exzisionsreparatur (BER) durch Interaktion mit Uracil-DNA-Glycosylase (UNG) und rekrutiert SMARCAL1/HARP zu Schadensstellen für den Neustart der Replikationsgabel.
• Darüber hinaus stimuliert RPA die 5'-3'-Helikaseaktivität von BRIP1/FANCJ, das an der Reparatur von Zwischenstrangvernetzungen und der Telomererhaltung beteiligt ist. Verwandte Referenzen: PMID:17596542
• Das Protein ist überwiegend kernständig und lokalisiert an PML-Körperchen; es unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die seine Funktionen im DNA-Metabolismus regulieren.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, was sich in den beobachteten Molekulargewichten von 29, 30 und 38 kDa widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Resten 1-270 von humanem RPA2; daher kann der Antikörper mehrere Isoformen erkennen. Für den Western Blot erwarten Sie Banden um 29–38 kDa; validieren Sie dies in relevanten menschlichen Zelllinien oder Geweben.
• RPA2 ist ein kernständiges Phosphoprotein. Erwägen Sie die Verwendung von Phosphataseinhibitoren in Lysepuffern und vergleichen Sie gegebenenfalls mit phosphatasebehandelten Proben, um phosphorylierungsabhängige Verschiebungen aufzulösen.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) werden Standardmethoden zur Antigenretrieval empfohlen. Optimieren Sie die Verdünnung des primären Antikörpers und die Detektionsbedingungen für Ihren Gewebetyp.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) verwenden Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, die für Kernantigene geeignet sind. Fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• Dieser Antikörper ist auch für ELISA geeignet; stellen Sie sicher, dass das rekombinante Protein oder Lysat richtig beschichtet und geblockt ist.

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